【摘 要】
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目的 利用原核表达系统诱导表达2型猪链球菌（Streptococcus suis 2,S.suis 2）分裂相关因子GpsB重组蛋白,为后续研究奠定基础。方法以S.suis 2菌株05ZYH33全基因组DNA为模板,经P
【机 构】
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南京师范大学生命科学学院,南京军事医学研究所
【基金项目】
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国家自然科学基金(Nos.81571965,1172794,81071317),江苏省自然科学基金项目(No.BK20151091),江苏省333工程科研资助项目(No.BRA2014363).
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目的 利用原核表达系统诱导表达2型猪链球菌（Streptococcus suis 2,S.suis 2）分裂相关因子GpsB重组蛋白,为后续研究奠定基础。方法以S.suis 2菌株05ZYH33全基因组DNA为模板,经PCR扩增得到目的基因片段。目的 基因经双酶切后连接至表达载体pET32a,转化大肠杆菌（Escherichia coli,E.coli）DH5α感受态细胞。重组质粒经测序鉴定正确后转化E.coli BL21感受态细胞。获得的重组表达菌经IPTG诱导表达目的蛋白。利用Ni离子亲和层析柱纯化重组蛋白,并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。利用重组蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体 结果 成功构建出重组表达载体pET32agpsB,并经IPTG诱导表达出目的蛋白。重组蛋白主要存在于表达菌裂解液上清中,分子质量约30KD,与预期大小一致。Western blot检测发现,该蛋白能被His-Tag单克隆抗体特异性识别。制备的多克隆抗体能特异性识别重组GpsB蛋白（rGpsB）。结论 成功表达和纯化了r Gps B并获得了该蛋白的多克隆抗体,为进一步研究该蛋白在S.suis 2分裂过程中的作用鉴定了基础。
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