【摘 要】
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目的构建以甲胎蛋白增强子(AFP-E)和白蛋白启动子(ALB-P)联合转录调控序列(AFPenh+ALBprom,EP)为启动子的重组腺相关病毒基因治疗载体,用于肝细胞肝癌(HCC)的靶向基因治疗研
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目的构建以甲胎蛋白增强子(AFP-E)和白蛋白启动子(ALB-P)联合转录调控序列(AFPenh+ALBprom,EP)为启动子的重组腺相关病毒基因治疗载体,用于肝细胞肝癌(HCC)的靶向基因治疗研究.方法用PCR方法扩增EP基因片段,将EP基因片段顺义克隆至重组腺相关病毒载体系统(AAV Helper-Free System)中表达质粒pAAV-IRES-hrGFP的启动子位点,并替换其原有的巨细胞病毒(CMV)启动子,构建出以EP为启动子的表达质粒pAAV-IRES-hrGFP-EP; 再将pAAV-IRES-hrGFP-EP与AAV Helper-Free System中的控制质粒pAAV-RC和辅助质粒pHelper用脂质体转染法共转染人胚肾细胞(293细胞),生成以EP为启动子的、可用于HCC靶向基因治疗的重组腺相关病毒载体(rAAV-EP).结果成功构建并包装出以EP为启动子的重组腺相关病毒载体rAAV2-EP,病毒滴度达1.2×105/ml.结论构建的以腺相关病毒为载体、受AFP-E和ALB-P联合转录调控序列驱动的重组腺相关病毒载体rAAV2-EP,可望能用于HCC靶向基因治疗研究,并为肝脏疾病的靶向基因治疗提供先进载体系统.
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