【摘 要】
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目的:建立扩增登革2型病毒基因组全长cDNA的融合PCR法,为深入探讨病毒基因组的结构与功能提供有效的技术途径.方法:根据我国登革2型病毒D2-43株序列设计引物,首先采用长链RT-
【机 构】
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军事医学科学院微生物学流行病学研究所,
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目的:建立扩增登革2型病毒基因组全长cDNA的融合PCR法,为深入探讨病毒基因组的结构与功能提供有效的技术途径.方法:根据我国登革2型病毒D2-43株序列设计引物,首先采用长链RT-PCR技术扩增病毒基因组5′及3′半分子,然后以半分子采用融合PCR法将两个半分子构建成全长cDNA分子.为进一步证实所构建全长cDNA分子的特异性,再以融合PCR产物为模板扩增5′非编码区序列,与pGEM-T载体连接,在377A型自动测序仪进行序列分析.结果:通过对逆转录反应及PCR扩增条件的优化,建立了制备大片段cDNA及构建全长cDNA分子的融合PCR方法.扩增的我国登革2型病毒的5′及3′半分子的长度均为5 kb左右,采用融合PCR方法制备的全长cDNA长约11 kb,与预期大小一致,非编码区测序结果表明扩增产物为D2-43所特有.结论:所建立的融合PCR方法是构建登革病毒基因组全长cDNA的有效技术.
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