目前，悬浮CHO细胞作为外源蛋白的最有潜力的工程细胞株被广泛应用，探索其高密度生长和高表达外源蛋白的培养条件也成为研究的热点。葡萄糖和丁酸钠在促进CHO细胞生长和外源蛋白表达方面具有重要作用，所以研究葡萄糖和丁酸钠对CHO-rHSA工程细胞表达重组人血清白蛋白的影响有重要的应用价值。首先利用单因素试验确定了葡萄糖和丁酸钠对CHO-rHSA工程细胞表达重组人血清白蛋白的作用，并筛选出最优添加条件；然后利用双因素组合作用试验优选出可有效提高rHSA表达量的葡萄糖及丁酸钠的组合培养条件。细胞培养第3天开始，每48 h添加终浓度为7 g/L的葡萄糖，可使rHSA产量平均提高121.93%；细胞培养第2天添加终浓度为1.0 mmoL/L的丁酸钠，可使rHSA产量平均提高110.01%；丁酸钠和葡萄糖组合使用可使CHO-rHSA工程细胞株培养时间从7 d左右延长到14 d左右，使rHSA表达量达平均达到了85.642 mg/L，rHSA表达量与未处理组相比平均提高了212.49%，比单独使用葡萄糖平均提高了134.85%，比单独使用丁酸钠平均提高了88.35%。确定待细胞培养48 h 时添加1.0 mmol/L 丁酸钠和3.0→7.0 g/L葡萄糖为CHO工程细胞株高效表达的培养条件。丁酸钠和葡萄糖组合使用可更高效的表达外源蛋白，葡萄糖可以减弱丁酸钠对CHO细胞生长的抑制作用，为提高CHO工程细胞株外源蛋白表达提供新的理论依据。