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中图分类号：R743 文献标识码 ：A 文章编号：1009_816X(2011)06_0433_03
DOI:10.3969/j.issn.1009_816X.2011.06.07The Influence of the Anti_platelet Drugs on Platelet Activation of th e Patients with Acute Cerebral Infarction. ZHANG Bing， HU Zheng_gang， WANG Ya_xian，et al. Department of neuro logy，HuZhou Central Hospital，Zhejiang 313000, China
［Abstract］ Objective To observe and compare the effects of asp irin and clopidogrel on CD62P and CD63 expression in platelets of patients with acute cerebral infarction (ACI). Methods 72 patients with ACI were divided into two groups: as pirin group and clopidogrel group. Before and after treating, the expression of CD62P and CD63 in patients with ACI were detected by flow cytometry. The effects of the aspirin and the clopidogrel were observed and compared. Results After treating, the expression of CD62P and CD63 in the two groups were lower than tha t before treating. The levels of CD62P and CD63 in the clopidogrel group were ob viously lower than those in the aspirin group, the differences were significant. Conclusions For the patients with ACI, clopidogrel can more deep ly repress the expressions of CD62P and CD63 in platelets than aspirin. And trea tment with clopidogrel is probable more efficient.
［Key words］ Aspirin; Clopidogrel; Cerebral infarction; CD62P; CD63
急性脑梗死(ACI)是中老年人群中的常见病，具有高发病率、高致残率和高死亡率的特点， 是危害我国人民群众生命健康的主要原因之一，其发病机制十分复杂。近年来对于血小板活 化功能亢进与缺血性脑血管病的关系日益受到重视。血小板α_颗粒膜蛋白(CD62P)和溶酶体 膜蛋白(CD63)均为活化血小板的膜糖蛋白，可以作为血小板活化的标志，检测这些指标可了 解血小板的活化程度［1］。阿司匹林是一种经典的抗血小板药物， 有大量的循证医学依据证明其在降低缺血性脑血管病的发病率和减少病死率的疗效。氯吡格 雷是一种新颖的抗血小板药物，主要通过阻断二磷酸腺苷(ADP)受体而抑制血小板活性。本 研究比较阿司匹林与氯吡格雷对急性脑梗死患者血小板CD62P、CD63表达的影响及其动态变 化过程，为ACI治疗时药物的选择提供依据。
1 资料与方法
1.1 一般资料： 选择2009年7月至2011年4月于我院神经内科住院的72例急性脑梗死（ACI）患者。随机分为 阿司匹林组39例，其中男22例，女17例，年龄45～78(58.23±10.69)岁；氯吡格雷组 33例，其中男19例，女14例，年龄48～85(59.36±11.26)岁。两组患者的性别、年龄 、病情程度以及合并疾病等差异无统计学意义(P＞0.01)，见表1。纳入标准：（1）符合1995年第四届全国脑血管病学术会议修订的脑梗死诊断 标准。（2）经头颅CT或MRI证实。（3）首次发病且于发病后72小时内入院的患者。排 除标准：（1）脑栓塞患者，如心源性脑栓塞。（2）有以下影响CD62P、CD63表达水平 的情况：1个月内有特殊治疗史（放射疗法、抗肿瘤药物治疗及手术者），有肿瘤、风湿性 疾病、肝硬化、血小板减少性紫癜、慢性肾衰竭、银屑病、溃疡性结肠炎等疾病者。（3） 近一个月内有使用以下影响CD62P、CD63表达水平的药物，如抗血小板药物（阿司匹林、氯 吡格雷、双嘧达莫），他汀类降脂药物等。
1.2 方法：
1.2.1 治疗方法：阿司匹林组患者入院后予以阿司匹林肠溶片(商品名：拜阿司匹灵，由 德 国拜耳公司生产)200mg，每日1次，口服，连用14天。氯吡格雷组患者予以氯吡格雷(商品名 ：波立维，由杭州赛诺菲民生制药有限公司生产)75mg，每日1次，口服，连用14天。两组同 时酌情给予降压、降糖、调脂、脑保护剂、脱水剂及对症治疗，治疗期间均不使用溶栓、抗 凝及降纤药物。
1.2.2 CD62P、CD63表达水平检测：急性脑梗死患者在入院当天治疗前及治疗后第3、7 和14天，各采空腹肘静脉血2ml（入院当天采血不要求空腹），置于2%EDTA抗凝试管中， 混匀、离心后分离富含血小板的血浆，1小时内用全血流式细胞术检测血小板CD62P、CD63表 达水平。
1.3 统计学处理：采用SPSS12.0版软件进行统计学分析，实验数据以均数±标准差（ x－±s）表示，所有计量资料进行正态性检 验和方差齐性检验，偏态分布的变量及方差不齐者，经对数转换后进行分析，资料比较采用 t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 阿司匹林组与氯吡格雷组对血小板膜糖蛋白CD62P表达水平影响的比较：两组治 疗后血小板CD62P表达水平均逐渐下降，于第14天时，较治疗前有明显下降(P<0.01)， 且氯吡格雷组比对照组下降更明显(均P<0.05)，见表2。
2.2 阿司匹林组与氯吡格雷组对血小板膜糖蛋白CD63表达水平影响的比较：两组治疗后血 小板CD63表达水平均逐渐下降，于第14天时，较治疗前有明显下降(P<0.01)，且氯吡 格雷组比对照组下降更明显(均P<0.05)，见表3。
3 讨论
急性脑梗死（ACI）的发病是诸多因素参与的复杂过程，国内外的研究证实血小板活化在ACI 的发病机制中发挥了重要作用［2，3］。在ACI的病理过程中，血小板活化是一个关 键因素。 血小板CD62P和CD63是两个血小板活化的特异性分子标志物。CD62P又称P选择素，属于选择 素家族黏附分子，定位于静止血小板α颗粒和活化血小板的质膜上。在静止血小板表面平均 每个血小板仅表达700个CD62P分子，如果被凝血酶等活化，血小板内的a颗粒迅速与 质膜融合，使平均每个血小板质膜上表达11000个CD62P分子。并介导血小板在内皮细胞上的 滚动、黏附以及血小板与单核细胞间的作用，故CD62P在血小板质膜上的表达或其阳性血小 板百分率的增加被认为使激活血小板的特异性标志物［4］。CD63为血小板溶酶体完 整膜糖蛋 白，在静止血小板表面仅有极少量表达，当血小板被激活时，CD63随活化血小板的“脱颗粒 ”发生易位，颗粒与血小板质膜融合后，在其表面大量表达。所以CD63也是血小板活化的特 异性分子标志物之一，能够传送中性粒细胞的活化信号，促进中性粒细胞黏附于内皮细胞， 导致血管炎的产生［5］。
本文中，我们把急性脑梗死患者随机分成阿司匹林组和氯吡格雷组，采用两种不同抗血 小板药物进行治疗，发现氯吡格雷组与阿司匹林组的患者进行抗血小板治疗后，血小板CD62 P及CD63的表达均呈逐步下降，2周后血小板CD62P及CD63的表达较治疗前均有明显下降。说明两种药物在治疗急性脑梗死中，能明显抑制血小板活化，在一定程度上，阻断血小板活 化过程，预防复发。阿司匹林的抗血小板作用机理是使血小板的环氧合酶乙酰化，抑制环内 过氧化物的生成，减少血栓素A2（TXA2）的生成，从而抑制血小板胞浆内花生四稀酸代 谢，抑制血小板活化，进而降低CD62P，CD63的表达，抗血小板的聚集，减少血栓的形成， 此外，尚有拮抗5_羟色胺受体的作用，从而减少CD62P信号系统传递作用及其对组织因子途 径凝血系统活化作用［6］。氯吡格雷是一种新的血小板聚集抑制剂，通过选择性抑 制二磷酸腺苷（ADP）与血小板受体的结合及继发的ADP介导的糖蛋白GPIIb/IIIa复合物 的活化，因此可抑制血小板聚集，抑制血小板活化，降低CD62P与CD63的表达。此外，氯吡 格雷还能通过阻断由释放的ADP引起的血小板活化的扩增，抑制其它激动剂诱导的血小板聚 集。
本文中还发现治疗2周后氯吡格雷组较阿司匹林组下降更明显，这和CAPRIE试 验在动脉粥样硬化患者中氯吡格雷效果略优于阿司匹林吻合。显示对于急性脑梗死，氯吡格 雷比阿司匹林在降低血小板的活化，抑制血小板CD62P、CD63表达水平方面作用更强，可能 取得更好的临床疗效。这也与Yip和Wallaschofski等人试验结果类似。Yip等人用流式细胞 仪分析87例脑梗死患者，发现急性期血小板CD62P的表达明显升高，发病21天明显下降，发 病90天下降更明显，与阿司匹林相比，氯吡格雷对血小板CD62P表达的作用更明显［7］ 。对于这种现象的原因，Wallaschofski等人认为无论对男性还是女性，催乳素（prolact in）都是缺血性卒中的危险因素，高催乳素血症通过增强血小板活性，使血栓易于形成。对 催乳素刺激下的血小板CD62P表达，阿司匹林没有影响，而氯吡格雷可以明显抑制其表达 ［8］。
本文对于阿司匹林组组和氯吡格雷组的比较研究中，由于医学伦理学的原因，没有设置对 照组，因此不能证明血小板CD62P及CD63的表达的下降是否完全由于抗血小板药物所致，还 是包括由于其它原因，如其它药物的影响，或本身随着病程的演变而降低。但本文研究显示 ：氯吡格雷比阿司匹林在抑制血小板CD62P、CD63表达水平，降低血小板的活化方面作 用更强，有可能获得更好的临床疗效。
总之，血小板活化对于急性脑梗死的发生起了重要的作用，应早期检测血小板活化标记物 如CD62P、CD63表达水平，一旦发生急性脑梗死，应尽早使用抗血小板药物如氯吡格雷进行 治疗，对预防和治疗急性脑梗死发生具有重要意义。
参考文献
［1］Michelson AD, Barmard MR, Krueger LA, et al. Evaluation of platele t function by flow cytometry［J］. Methods,2000,21(3):259-270.
［2］朱海英，冷振璞，王敏忠，等.急性脑梗死患者血小板表达血小板内皮细胞黏附分子_ 1、P选择素的改变及其意义［J］.临床神经病学杂志，2005，18(5):335-337.
［3］Li N, Hu H, Lindqvist M, et al. Platelet_leukocyte cross talk in whole bloo d［J］.Arterioscler Thromb Vasc Bio１,2000,20(12):2702-2708.
［4］Laterum OD, Bjeknes K. Flow cytometry in homotogy［M］. London: Academic Pr ess,1999：153-163.
［5］Leo R, Pratico D, Iuliano L, et al. Platelet Activation by Superoxide Anion and Hydroxyl Radicals Intrin_sically Generated by Platelets that had Undergone Anoxia and than Reoxygenated［J］.Circulation,1997,95(4):885-891.
［6］王建中，曹凌，袁家颖，等.三种抗血小板药物在体外对血小板活化的抑制作用［J］. 中华检验医学杂志，2002，25(1):8-10.
［7］Yip HK, Chen SS, Liu JS, et al. Serial changes in platelet activation in pa tients after ischemic stroke:role of pharmacodynamic modulation［J］.Stroke,2004 ,35(7):1683-1690.
［8］Wallaschofski H, Lohmann T, Hild E, et al. Enhanced platelet activation by prolactin in patients with ischemic stroke［J］.Thromb Haemost,2006,96(1):38-44.
DOI:10.3969/j.issn.1009_816X.2011.06.07The Influence of the Anti_platelet Drugs on Platelet Activation of th e Patients with Acute Cerebral Infarction. ZHANG Bing， HU Zheng_gang， WANG Ya_xian，et al. Department of neuro logy，HuZhou Central Hospital，Zhejiang 313000, China
［Abstract］ Objective To observe and compare the effects of asp irin and clopidogrel on CD62P and CD63 expression in platelets of patients with acute cerebral infarction (ACI). Methods 72 patients with ACI were divided into two groups: as pirin group and clopidogrel group. Before and after treating, the expression of CD62P and CD63 in patients with ACI were detected by flow cytometry. The effects of the aspirin and the clopidogrel were observed and compared. Results After treating, the expression of CD62P and CD63 in the two groups were lower than tha t before treating. The levels of CD62P and CD63 in the clopidogrel group were ob viously lower than those in the aspirin group, the differences were significant. Conclusions For the patients with ACI, clopidogrel can more deep ly repress the expressions of CD62P and CD63 in platelets than aspirin. And trea tment with clopidogrel is probable more efficient.
［Key words］ Aspirin; Clopidogrel; Cerebral infarction; CD62P; CD63
急性脑梗死(ACI)是中老年人群中的常见病，具有高发病率、高致残率和高死亡率的特点， 是危害我国人民群众生命健康的主要原因之一，其发病机制十分复杂。近年来对于血小板活 化功能亢进与缺血性脑血管病的关系日益受到重视。血小板α_颗粒膜蛋白(CD62P)和溶酶体 膜蛋白(CD63)均为活化血小板的膜糖蛋白，可以作为血小板活化的标志，检测这些指标可了 解血小板的活化程度［1］。阿司匹林是一种经典的抗血小板药物， 有大量的循证医学依据证明其在降低缺血性脑血管病的发病率和减少病死率的疗效。氯吡格 雷是一种新颖的抗血小板药物，主要通过阻断二磷酸腺苷(ADP)受体而抑制血小板活性。本 研究比较阿司匹林与氯吡格雷对急性脑梗死患者血小板CD62P、CD63表达的影响及其动态变 化过程，为ACI治疗时药物的选择提供依据。
1 资料与方法
1.1 一般资料： 选择2009年7月至2011年4月于我院神经内科住院的72例急性脑梗死（ACI）患者。随机分为 阿司匹林组39例，其中男22例，女17例，年龄45～78(58.23±10.69)岁；氯吡格雷组 33例，其中男19例，女14例，年龄48～85(59.36±11.26)岁。两组患者的性别、年龄 、病情程度以及合并疾病等差异无统计学意义(P＞0.01)，见表1。纳入标准：（1）符合1995年第四届全国脑血管病学术会议修订的脑梗死诊断 标准。（2）经头颅CT或MRI证实。（3）首次发病且于发病后72小时内入院的患者。排 除标准：（1）脑栓塞患者，如心源性脑栓塞。（2）有以下影响CD62P、CD63表达水平 的情况：1个月内有特殊治疗史（放射疗法、抗肿瘤药物治疗及手术者），有肿瘤、风湿性 疾病、肝硬化、血小板减少性紫癜、慢性肾衰竭、银屑病、溃疡性结肠炎等疾病者。（3） 近一个月内有使用以下影响CD62P、CD63表达水平的药物，如抗血小板药物（阿司匹林、氯 吡格雷、双嘧达莫），他汀类降脂药物等。
1.2 方法：
1.2.1 治疗方法：阿司匹林组患者入院后予以阿司匹林肠溶片(商品名：拜阿司匹灵，由 德 国拜耳公司生产)200mg，每日1次，口服，连用14天。氯吡格雷组患者予以氯吡格雷(商品名 ：波立维，由杭州赛诺菲民生制药有限公司生产)75mg，每日1次，口服，连用14天。两组同 时酌情给予降压、降糖、调脂、脑保护剂、脱水剂及对症治疗，治疗期间均不使用溶栓、抗 凝及降纤药物。
1.2.2 CD62P、CD63表达水平检测：急性脑梗死患者在入院当天治疗前及治疗后第3、7 和14天，各采空腹肘静脉血2ml（入院当天采血不要求空腹），置于2%EDTA抗凝试管中， 混匀、离心后分离富含血小板的血浆，1小时内用全血流式细胞术检测血小板CD62P、CD63表 达水平。
1.3 统计学处理：采用SPSS12.0版软件进行统计学分析，实验数据以均数±标准差（ x－±s）表示，所有计量资料进行正态性检 验和方差齐性检验，偏态分布的变量及方差不齐者，经对数转换后进行分析，资料比较采用 t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 阿司匹林组与氯吡格雷组对血小板膜糖蛋白CD62P表达水平影响的比较：两组治 疗后血小板CD62P表达水平均逐渐下降，于第14天时，较治疗前有明显下降(P<0.01)， 且氯吡格雷组比对照组下降更明显(均P<0.05)，见表2。
2.2 阿司匹林组与氯吡格雷组对血小板膜糖蛋白CD63表达水平影响的比较：两组治疗后血 小板CD63表达水平均逐渐下降，于第14天时，较治疗前有明显下降(P<0.01)，且氯吡 格雷组比对照组下降更明显(均P<0.05)，见表3。
3 讨论
急性脑梗死（ACI）的发病是诸多因素参与的复杂过程，国内外的研究证实血小板活化在ACI 的发病机制中发挥了重要作用［2，3］。在ACI的病理过程中，血小板活化是一个关 键因素。 血小板CD62P和CD63是两个血小板活化的特异性分子标志物。CD62P又称P选择素，属于选择 素家族黏附分子，定位于静止血小板α颗粒和活化血小板的质膜上。在静止血小板表面平均 每个血小板仅表达700个CD62P分子，如果被凝血酶等活化，血小板内的a颗粒迅速与 质膜融合，使平均每个血小板质膜上表达11000个CD62P分子。并介导血小板在内皮细胞上的 滚动、黏附以及血小板与单核细胞间的作用，故CD62P在血小板质膜上的表达或其阳性血小 板百分率的增加被认为使激活血小板的特异性标志物［4］。CD63为血小板溶酶体完 整膜糖蛋 白，在静止血小板表面仅有极少量表达，当血小板被激活时，CD63随活化血小板的“脱颗粒 ”发生易位，颗粒与血小板质膜融合后，在其表面大量表达。所以CD63也是血小板活化的特 异性分子标志物之一，能够传送中性粒细胞的活化信号，促进中性粒细胞黏附于内皮细胞， 导致血管炎的产生［5］。
本文中，我们把急性脑梗死患者随机分成阿司匹林组和氯吡格雷组，采用两种不同抗血 小板药物进行治疗，发现氯吡格雷组与阿司匹林组的患者进行抗血小板治疗后，血小板CD62 P及CD63的表达均呈逐步下降，2周后血小板CD62P及CD63的表达较治疗前均有明显下降。说明两种药物在治疗急性脑梗死中，能明显抑制血小板活化，在一定程度上，阻断血小板活 化过程，预防复发。阿司匹林的抗血小板作用机理是使血小板的环氧合酶乙酰化，抑制环内 过氧化物的生成，减少血栓素A2（TXA2）的生成，从而抑制血小板胞浆内花生四稀酸代 谢，抑制血小板活化，进而降低CD62P，CD63的表达，抗血小板的聚集，减少血栓的形成， 此外，尚有拮抗5_羟色胺受体的作用，从而减少CD62P信号系统传递作用及其对组织因子途 径凝血系统活化作用［6］。氯吡格雷是一种新的血小板聚集抑制剂，通过选择性抑 制二磷酸腺苷（ADP）与血小板受体的结合及继发的ADP介导的糖蛋白GPIIb/IIIa复合物 的活化，因此可抑制血小板聚集，抑制血小板活化，降低CD62P与CD63的表达。此外，氯吡 格雷还能通过阻断由释放的ADP引起的血小板活化的扩增，抑制其它激动剂诱导的血小板聚 集。
本文中还发现治疗2周后氯吡格雷组较阿司匹林组下降更明显，这和CAPRIE试 验在动脉粥样硬化患者中氯吡格雷效果略优于阿司匹林吻合。显示对于急性脑梗死，氯吡格 雷比阿司匹林在降低血小板的活化，抑制血小板CD62P、CD63表达水平方面作用更强，可能 取得更好的临床疗效。这也与Yip和Wallaschofski等人试验结果类似。Yip等人用流式细胞 仪分析87例脑梗死患者，发现急性期血小板CD62P的表达明显升高，发病21天明显下降，发 病90天下降更明显，与阿司匹林相比，氯吡格雷对血小板CD62P表达的作用更明显［7］ 。对于这种现象的原因，Wallaschofski等人认为无论对男性还是女性，催乳素（prolact in）都是缺血性卒中的危险因素，高催乳素血症通过增强血小板活性，使血栓易于形成。对 催乳素刺激下的血小板CD62P表达，阿司匹林没有影响，而氯吡格雷可以明显抑制其表达 ［8］。
本文对于阿司匹林组组和氯吡格雷组的比较研究中，由于医学伦理学的原因，没有设置对 照组，因此不能证明血小板CD62P及CD63的表达的下降是否完全由于抗血小板药物所致，还 是包括由于其它原因，如其它药物的影响，或本身随着病程的演变而降低。但本文研究显示 ：氯吡格雷比阿司匹林在抑制血小板CD62P、CD63表达水平，降低血小板的活化方面作 用更强，有可能获得更好的临床疗效。
总之，血小板活化对于急性脑梗死的发生起了重要的作用，应早期检测血小板活化标记物 如CD62P、CD63表达水平，一旦发生急性脑梗死，应尽早使用抗血小板药物如氯吡格雷进行 治疗，对预防和治疗急性脑梗死发生具有重要意义。
参考文献
［1］Michelson AD, Barmard MR, Krueger LA, et al. Evaluation of platele t function by flow cytometry［J］. Methods,2000,21(3):259-270.
［2］朱海英，冷振璞，王敏忠，等.急性脑梗死患者血小板表达血小板内皮细胞黏附分子_ 1、P选择素的改变及其意义［J］.临床神经病学杂志，2005，18(5):335-337.
［3］Li N, Hu H, Lindqvist M, et al. Platelet_leukocyte cross talk in whole bloo d［J］.Arterioscler Thromb Vasc Bio１,2000,20(12):2702-2708.
［4］Laterum OD, Bjeknes K. Flow cytometry in homotogy［M］. London: Academic Pr ess,1999：153-163.
［5］Leo R, Pratico D, Iuliano L, et al. Platelet Activation by Superoxide Anion and Hydroxyl Radicals Intrin_sically Generated by Platelets that had Undergone Anoxia and than Reoxygenated［J］.Circulation,1997,95(4):885-891.
［6］王建中，曹凌，袁家颖，等.三种抗血小板药物在体外对血小板活化的抑制作用［J］. 中华检验医学杂志，2002，25(1):8-10.
［7］Yip HK, Chen SS, Liu JS, et al. Serial changes in platelet activation in pa tients after ischemic stroke:role of pharmacodynamic modulation［J］.Stroke,2004 ,35(7):1683-1690.
［8］Wallaschofski H, Lohmann T, Hild E, et al. Enhanced platelet activation by prolactin in patients with ischemic stroke［J］.Thromb Haemost,2006,96(1):38-44.