氢吗啡酮通过调节雷帕霉素靶蛋白介导的自噬改善脓毒症性脑病的研究

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目的

探讨氢吗啡酮对脓毒症性脑病的影响,以及氢吗啡酮对脓毒症性脑病的神经保护与雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路介导的自噬的关系。

方法

无特定病原体(SPF)级健康雄性C57BL/6小鼠160只,8~10周龄,体重20~25 g,采用随机数字表法分为4组(n=40):假手术组(Sham)、脓毒症性脑病组(SAE)、脓毒症性脑病 氢吗啡酮组(SAE HP)、脓毒症性脑病 氢吗啡酮 mTOR激动剂MHY1485组(SAE HP MHY)。采用盲肠结扎穿孔法(CLP)建立脓毒症模型,SAE HP组于模型建立30 min后给予氢吗啡酮0.1 mg/kg,SAE HP MHY组于模型建立前1 d腹腔注射MHY1485 10 mg/kg,持续2 d,模型建立30 min后给予氢吗啡酮0.1 mg/kg。记录术后8 d生存情况。术后24 h处死小鼠,采用苏木精-伊红(HE)染色观察海马组织病理学结果,采用酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测海马组织白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测海马组织自噬相关蛋白p-mTOR、mTOR、微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ/LC3-Ⅰ、与B淋巴细胞瘤-基因2相互作用的肌球蛋白样螺旋蛋白(Beclin-1)的表达,免疫荧光染色观察海马组织LC3阳性细胞。CLP术后4~8 d行Morris水迷宫实验,记录逃避潜伏期和目标象限停留时间。组间比较采用单因素方差分析。

结果

SAE组海马组织IL-1β、IL-6、TNF-α水平高于Sham组[(231±20) ng/L比(111±15) ng/L、(191±20) ng/L比(55±3) ng/L、(351±20) ng/L比(80±6) ng/L,F=139.942、274.485、1 055.362,P

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