MiR-4313靶向TBX15抑制肾透明细胞癌增殖的分子机制

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目的 探讨miR-4313对肾透明细胞癌(ccRCC)增殖能力的影响及其分子机制.方法 采用中国科学院细胞库的人肾癌细胞株786-O和OS-RC-2为主要研究对象,并分为阴性对照组、miR-4313模拟物组和miR-324-3p模拟物组.四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞的增殖能力;流式细胞术检测细胞周期时相的变化;蛋白质印迹法检测细胞周期相关蛋白Cyclin D1、Cyclin D3、p21、p27和p53的表达;运用生物信息学网站分析miR-4313的候选靶基因,并运用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测转染miR-4313模拟物后786-O细胞中各候选靶基因的表达水平;运用蛋白质印迹法检测转染miR-4313模拟物后,786-O细胞中TBX15蛋白表达;运用荧光素酶双报告基因系统检测miR-4313与TBX15的3′-UTR是否能够直接结合.结果 过表达miR-4313后,肾癌细胞的增殖能力在24、36、48 h均低于阴性对照组,F=337.696,P<0.001.miR-4313过表达组G0/G1期细胞比例从(57.15±1.62)%升高至(64.45±0.05)%,F=60.860,P=0.001;G2/M期细胞比例从(24.25±2.52)%下降至(19.44±0.51)%,F=115.174,P<0.001.miR-4313过表达后Cyclin D1蛋白表达降低,F=36.478,P=0.004;Cyclin D3蛋白表达降低,F=122.697,P<0.001;而p21蛋白表达升高,F=110.501,P<0.001;p27蛋白表达升高,F=74.595,P=0.001;p53表达升高,F=185.271,P<0.001.miR-4313过表达后TBX15基因表达降低,F=39.044,P=0.003;TBX15蛋白表达降低,F=54.212,P=0.002.荧光素酶报告结果显示,miR-4313能与TBX15的3′-UTR直接结合,F=16.368,P=0.001.结论 miR-4313可通过靶向负调控TBX15的表达进而抑制ccRCC细胞的增殖能力,且TBX15可成为临床评估ccRCC预后的可靠指标.
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