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本试验旨在构建用于牛肌肉生长抑制素（MSTN）基因敲除的置换型打靶载体。基于已发布的MSTN基因序列，选取第3外显子约600bp作为靶位点，在其上、下游设计2条同源臂，分别为4．4和1．4kh。以pPNT Ⅲ为骨架载体，在其2个多克隆位点处插入同源臂，构建出置换型打靶载体MSTN—KO—pPNT Ⅲ。结果显示，经DNA测序及酶切鉴定证实1．4kb同源短臂和4．4kb同源长臂均正确插入基础载体中。结果表明，成功构建出牛MSTN—KO-pPNT Ⅲ打靶载体。