【摘 要】
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目的 了解日本血吸虫促凋亡基因SjBAD的生物学、免疫学和转录表达特征,评估SjBAD重组蛋白作为日本血吸虫病疫苗候选分子的潜力.方法 根据SjBAD的参考序列设计引物,应用PCR技
【机 构】
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南京农业大学动物医学院,中国农业科学院上海兽医研究所、农业部动物寄生虫学重点实验室
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目的 了解日本血吸虫促凋亡基因SjBAD的生物学、免疫学和转录表达特征,评估SjBAD重组蛋白作为日本血吸虫病疫苗候选分子的潜力.方法 根据SjBAD的参考序列设计引物,应用PCR技术扩增SjBAD基因,构建重组表达质粒pET-28a(+)-SjBAD.采用实时定量PCR检测SjBAD基因在日本血吸虫不同发育期及42 d雌、雄虫体内的转录水平;应用Western blotting和间接ELISA法分析SjBAD重组蛋白的抗原性和免疫原性.用重组抗原SjBAD免疫BALB/c小鼠,通过计算减虫率及肝脏减卵率,评估重组抗原作为血吸虫病候选疫苗分子的潜力.结果 成功克隆了日本血吸虫SjBAD基因,构建了重组表达质粒pET-28a(+)-SjBAD,并在大肠杆菌中成功表达,重组蛋白分子量约为22 kDa.Western blotting表明SjBAD具有较好的抗原性和免疫原性,间接ELISA法检测表明重组蛋白免疫小鼠产生了高水平的特异性抗体IgG.实时定量PCR检测发现SjBAD基因在日本血吸虫的各个发育阶段均有转录,以14d表达量最高,且在雄虫体内的表达量高于雌虫.两次动物免疫试验表明,重组蛋白SjBAD在BALB/c小鼠体内诱导了30.82％和27.87％的减虫率,及42.52％和45.84％的肝脏虫卵减少率,均显著高于PBS对照组(P均＜0.05).结论 成功克隆、表达了日本血吸虫促凋亡相关基因SjBAD,该基因在日本血吸虫不同发育期虫体内均有表达.纯化的重组SjBAD蛋白在小鼠体内能诱导产生部分抗血吸虫感染的免疫保护效果.
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