DNMT3a基因shRNA质粒表达载体的构建及其沉默作用

来源 :中国老年学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户：andytong0123

【摘要】

：

目的以DNMT3a mRNA保守序列为靶基因设计针对DNMT3a mRNA的siRNA序列和无效干扰对照序列(HK),并利用基因重组技术将其克隆到真核表达载体p Gensil-1中,构建p Genesil-1-DNMT3

【作者】

：

吴艳凤李德涛郑倩李雪薛成军陈辉

【机构】

：

重庆医科大学附属第一医院检验科

【出处】

：

中国老年学杂志

【发表日期】

：

2015年6期

【关键词】

：

DNMT3a RNA干扰小发卡RNA 重组质粒 A549-DDP细胞株

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目的以DNMT3a mRNA保守序列为靶基因设计针对DNMT3a mRNA的siRNA序列和无效干扰对照序列(HK),并利用基因重组技术将其克隆到真核表达载体p Gensil-1中,构建p Genesil-1-DNMT3a-shRNA、p Genesil-1-HK-shRNA重组质粒。方法应用转化技术将重组质粒转化到大肠杆菌DH5a中,通过卡那霉素抗性筛选出阳性菌落后提取质粒进行酶切和测序鉴定,应用质粒转染技术转染耐顺铂肺腺癌A549细胞(A549-DDP),利用RT-PCR技术检测转染重组质粒24、48

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