【摘 要】
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目的:研究表达含白介素(IL)-18基因的质粒,对结核分枝杆菌(MTB)H37RvAg85A基因疫苗诱导免疫应答的影响.方法:从正常人外周血单核细胞(PMBCs)中提取RNA,用RT-PCR扩增IL-18 cDN
【机 构】
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西安交通大学第二医院泌尿外科,第四军医大学微生物学系
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目的:研究表达含白介素(IL)-18基因的质粒,对结核分枝杆菌(MTB)H37RvAg85A基因疫苗诱导免疫应答的影响.方法:从正常人外周血单核细胞(PMBCs)中提取RNA,用RT-PCR扩增IL-18 cDNA,并克隆人载体pGEM-Teasy中.测序证实后,亚克隆真核表达载体pcDNA3.1的BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切位点.将分别表达人IL-18基因的真核表达质粒pcIL18与MTB pcAg85A基因疫苗联合肌注免疫BALB/c小鼠,共免疫3次,每次间隔2周.每次免疫后2周采血,分离血清,用ELISA检测小鼠血清抗Ag85A抗体的滴度.结果:用RT-PCR成功地从人PMBCs的RNA中扩增IL-18 cDNA,测序结果正确.用BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切鉴定证实,目的基因已插入载体pcDNA3.1中,阳性克隆命名为pcIL18.联合应用pcIL18,三次免疫后血清抗Ag85A抗体的滴度明显较单独应用pcAg85A增高.结论:pcIL18与pcAg85A基因疫苗联合免疫,可显著增强Ag85A抗原的特异性体液免疫应答.pcIL18+pcAg85A基因联合免疫是否具有增强Ag85A抗原特异性细胞免疫的作用有待进一步研究.
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