【摘 要】
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目的 构建pLVX-TD-IκBα-IRES-ZsGreen1慢病毒表达载体及包装病毒,观察稳定转染TD-IκBα对肾癌细胞株ACHN增殖和侵袭的影响.方法 从pCFG5-IEGZ-TD-IκBα质粒上获得的目的基因片段克隆入pLVX-IRES-ZsGreen1载体,并进行测序.将慢病毒载体与包装质粒deha8.91和p-VSVG以4∶3∶2比例共转染293T细胞,收集病毒上清并感染肾癌细胞株AC
【机 构】
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100853北京,解放军总医院泌尿外科肾脏疾病国家重点实验室,100853北京,解放军总医院泌尿外科肾脏疾病国家重点实验室,100853北京,解放军总医院泌尿外科肾脏疾病国家重点实验室,100853北
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目的 构建pLVX-TD-IκBα-IRES-ZsGreen1慢病毒表达载体及包装病毒,观察稳定转染TD-IκBα对肾癌细胞株ACHN增殖和侵袭的影响.方法 从pCFG5-IEGZ-TD-IκBα质粒上获得的目的基因片段克隆入pLVX-IRES-ZsGreen1载体,并进行测序.将慢病毒载体与包装质粒deha8.91和p-VSVG以4∶3∶2比例共转染293T细胞,收集病毒上清并感染肾癌细胞株ACHN,5d后采用Western blot检测TD-IκBα蛋白的表达,使用四唑氮化合物(MTS)和Transwell侵袭实验方法检测细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化.结果 成功构建pLVX-TD-IκBα-IRES-ZsGreen1慢病毒表达载体,包装病毒后成功感染ACHN细胞株,感染组细胞株中的TD-IκBα蛋白显著表达增高.感染组细胞在490 nm处吸光度值明显下降(P＜0.05).细胞迁移和侵袭实验中,相对于阴性对照组穿膜细胞数[(361.400 ±42.379)个和(328.500 ±27.031)个],感染组穿膜细胞数[(252.200±26.142)个和(127.300 ±35.572)个]显著减少(P＜0.05).结论 成功构建pLVX-TD-IκBα-IRES-ZsGreen1重组慢病毒表达载体并包装病毒,过表达TD-IκBα蛋白可显著降低ACHN细胞株的增殖、迁移和侵袭能力。
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