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目的
探讨Bcl-2基因对人胰腺癌SW1990细胞增殖及凋亡的影响。
方法设计并合成靶向Bcl-2基因的sgRNA(Bcl-2-sgRNA)，通过CRISPR-Cas9系统将其结合到CRISPR载体Cas9，经测序验证后转染人胰腺癌细胞株SW1990，筛选Bcl-2基因敲除稳转细胞，以野生型SW1990细胞作为对照。采用CCK-8法测定细胞生长曲线，通过克隆形成实验计数细胞克隆数，运用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡。
结果成功获得Bcl-2基因敲除的人胰腺癌SW1990细胞株，其Bcl-2蛋白表达缺失。与野生SW1990细胞比较，敲除Bcl-2基因的SW1990细胞的生长被抑制，细胞克隆形成数量显著减少[(160.7±10.0)个比(285.3±14.2)个]，G1期细胞比例显著增加[(84.51±0.97)%比(57.49±1.08)%]，S期细胞比例显著减少[(12.82±0.99)%比(27.56±1.65)%]，细胞凋亡率显著增加[(12.67±0.59)%比(0.37±0.35)%]，差异均有统计学意义(P值均<0.01)。
结论敲除Bcl-2基因可抑制胰腺癌SW1990细胞的生长，降低细胞克隆形成能力，使细胞阻滞在G1期，并显著增加细胞凋亡率。