【摘 要】
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优化了重组茶树咖啡酰辅酶A–O–甲基转移酶基因(CCoAOMT)在大肠杆菌中的表达,采用Ni–NTA亲和层析柱对重组蛋白进行纯化。以表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)为底物,进行体外
【机 构】
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国家植物功能成分利用工程技术研究中心,茶学教育部重点实验室,植物功能成分利用省部共建协同创新中心,湖南农业大学园艺学院
【基金项目】
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国家科学技术部重点研发计划课题(2018YFC1604403),湖南省科学技术厅中央引导地方科技发展项目(2019XF5041),湖南省科学技术厅重点研发计划项目(2018NK2031)
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优化了重组茶树咖啡酰辅酶A–O–甲基转移酶基因(CCoAOMT)在大肠杆菌中的表达,采用Ni–NTA亲和层析柱对重组蛋白进行纯化。以表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)为底物,进行体外酶促反应,采用HPLC测定反应产物EGCG3"Me的生成量。结果表明,CCoAOMT在E.coliBL21中能够高效表达,最优条件为诱导温度37℃,诱导时间4 h,异丙基–β–D–硫代半乳糖苷(IPTG)浓度0.5 mmol/L;重组蛋白经Ni–NTA亲和层析柱梯度洗脱达到了较好的纯化效果;重组酶在体外能够催化EG
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