【摘 要】
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目的 建立基于多重置换扩增及PCR （MDA-PCR）技术检测痕量结核分枝杆菌（M.tb）核酸的方法。方法 制备含有M.tb插入序列IS6110和IS1081的不同稀释浓度的质粒DNA标准品。MDA-PCR分别通过检测质粒DNA标准品和其他细菌标准株基因组DNA来验证该方法的敏感度及特异性。另外,通过对模拟结核性脑膜炎（TBM）患者脑脊液（CSF）标本检测,评价该方法检测临床标本的可行性。结果 M
【基金项目】
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国家重点研发计划项目（2016YFC0904500）；
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目的 建立基于多重置换扩增及PCR （MDA-PCR）技术检测痕量结核分枝杆菌（M.tb）核酸的方法。方法 制备含有M.tb插入序列IS6110和IS1081的不同稀释浓度的质粒DNA标准品。MDA-PCR分别通过检测质粒DNA标准品和其他细菌标准株基因组DNA来验证该方法的敏感度及特异性。另外,通过对模拟结核性脑膜炎（TBM）患者脑脊液（CSF）标本检测,评价该方法检测临床标本的可行性。结果 MDA-PCR方法对质粒DNA标准品IS6110、IS1081基因的最低检测下限分别为10、25拷贝,其检测敏感度是ST-PCR方法的40～100倍。另外,该方法对5种其他细菌标准株基因组DNA的检测结果均为阴性,无非特异性反应发生。MDA-PCR对模拟TBM患者CSF中M.tb IS6110及IS1081基因的最低检测下限均为1 CFU,其检测敏感度是ST-PCR的10~4～10~5倍。结论 MDA-PCR方法可提高对CSF中痕量M.tb核酸的检测效率,为TBM早期诊断提供了一种新的研究策略。
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