【摘 要】
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目的 研究化学修饰剂聚乙二醇(PEG)对德国小蠊(蟑螂)重组变应原rBla g 2变应原性的影响.方法 rBla g2在大肠肝菌中表达后,采用Ni+亲和层析纯化,然后甲氧基聚乙二醇2-N-羟基琥
【机 构】
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深圳大学过敏反应与免疫学研究所,广州医学院呼吸疾病国家重点实验室
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目的 研究化学修饰剂聚乙二醇(PEG)对德国小蠊(蟑螂)重组变应原rBla g 2变应原性的影响.方法 rBla g2在大肠肝菌中表达后,采用Ni+亲和层析纯化,然后甲氧基聚乙二醇2-N-羟基琥珀酰亚胺酯(mPEG2-NHS,Mr为10×103)修饰,经阳离子交换层析纯化,用SDS-PAGE、免疫印迹及ELISA分析其生物学特性.结果 rBla g 2纯化后的相对分子质量(Mr)约39×103;sDs-PAGE分析PEG-rBla g 2修饰产物,考马斯亮蓝染色可呈现5条带,而I2-KI染色则呈现7条带.对修饰产物的纯化表明阳离子交换层析可分离rBla g 2和PEG-rBla g 2;对修饰产物的免疫印迹分析显示Mr为100×103和130×103的修饰带可与蟑螂过敏患者血清特异性IgE结合,同时ELISA分析结果表明PEG-rBla g2复合物的体外免疫学反应性显著下降,仅为原来的42%.结论 PEG修饰可保持rB-la g 2与特异性抗体结合能力,却大大降低变应原的体外免疫学反应性,为重组低致敏原的研究提供了基础资料.
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