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研究副溶血弧菌群体感应(quorum sensing，QS)系统核心调控子OpaR对pilABCD的转录。
方法提取副溶血弧菌野生株(wild-type，WT)和opaR突变株(ΔopaR)的总RNA，采用实时定量PCR(quantitative real-time PCR，qPCR)研究OpaR对pilA(pilABCD首基因)的转录调控；将pilABCD上游调控区DNA序列克隆入pHRP309质粒的β-半乳糖苷酶基因上游，构建LacZ重组质粒，并将该重组质粒转入WT和ΔopaR中制备LacZ菌株，通过LacZ报告基因融合试验研究OpaR对pilA的调控以及pilA的时相表达。提取WT株总RNA，采用引物延伸试验研究pilABCD的转录起始位点；PCR扩增pilABCD上游调控区DNA序列，并纯化His-OpaR蛋白，通过凝胶阻滞试验(electrophoretic mobility shift assay，EMSA)研究His-OpaR与靶DNA片段是否有直接的结合作用，并进一步采用DNaseⅠ足迹试验分析其结合位点。
结果qPCR和LacZ报告基因融合试验显示OpaR对pilABCD的转录具有激活作用，pilA的表达水平随培养时间的延长而持续升高；引物延伸结果显示pilABCD只有一个转录起始位点T(-155)；EMSA和DNaseⅠ足迹试验结果显示OpaR对位于pilA的翻译起始位点上游-246~-197 bp和-181~-131 bp之间的DNA序列具有结合活性。
结论OpaR对pilABCD的转录具有直接的激活活性。