【摘 要】
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目的:利用常规脂质体介导转染shRNA(short hairpin RNA)建立CYP2E1(cytochrome P450 2E1)表达沉默的人肝实质细胞模型。方法:采用文献报道的CYP2E1的高效干扰位点,构建CYP2E1
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(81473418);国家林业局野生动植物保护项目(2012-2016);北京中医药大学东直门医院"111"协同创新院际合作项目(No.2016-DZM111-ZY008)
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目的:利用常规脂质体介导转染shRNA(short hairpin RNA)建立CYP2E1(cytochrome P450 2E1)表达沉默的人肝实质细胞模型。方法:采用文献报道的CYP2E1的高效干扰位点,构建CYP2E1的shRNA干扰载体(sh CYP2E1)以及同源无干扰作用的对照载体(sh NC,non-specific control),并通过阳离子脂质体Lipo Fiter TM介导转染人肝实质L02细胞,通过绿色荧光蛋白报告基因的表达指示及G418筛选阳性克隆,q RT-PCR(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction)测定稳定转染细胞系中CYP2E1的表达情况。结果:确定转染后G418最佳筛选浓度为400μg/m L,维持浓度为200μg/m L;获得了荧光表达率较高的L02-CYP2E1细胞(CYP2E1沉默组)和L02-NC细胞(转染对照组);q RT-PCR结果显示,所建细胞系L02-CYP2E1相对于L02-NC,其CYP2E1表达下调了近70%(P<0.05),表明CYP2E1干扰表达细胞模型构建成功。结论:利用常规脂质体转染法成功转染人肝实质L02细胞CYP2E1shRNA,建立了CYP2E1表达沉默的细胞系。
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