【摘 要】
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目的 建立稳定表达脑恶性肿瘤缺失基因1(DMBTl)的胆囊癌细胞株GBC-SD,研究其增殖特点.方法 将DMBTl全长表达质粒以脂质体为介导转染胆囊癌细胞株GBC-SD,G418筛选阳性克隆5~6周,免疫组织化学、Western blot及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测DMBT1蛋白及mRNA表达,噻唑蓝(MTT)绘制生存曲线及、血清下测细胞生存抑制率及免疫荧光观察细胞凋亡.结果 稳定转
【机 构】
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200032,上海,复旦大学附属中山医院普外科,200032,上海,复旦大学附属中山医院普外科,200032,上海,复旦大学附属中山医院普外科,200032,上海,复旦大学附属中山医院普外科,2000
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目的 建立稳定表达脑恶性肿瘤缺失基因1(DMBTl)的胆囊癌细胞株GBC-SD,研究其增殖特点.方法 将DMBTl全长表达质粒以脂质体为介导转染胆囊癌细胞株GBC-SD,G418筛选阳性克隆5~6周,免疫组织化学、Western blot及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测DMBT1蛋白及mRNA表达,噻唑蓝(MTT)绘制生存曲线及、血清下测细胞生存抑制率及免疫荧光观察细胞凋亡.结果 稳定转染后,实验组DMBT1蛋白相对表达量为0.82±0.11,对照组为0.24±0.03,实验组mRNA相对表达量为0.87±0.12,对照组为0.29±0.03,差异均有统计学意义(P<0.01);实验组无明显对数生长期且较早进入衰亡期,在无血清培基中增殖抑制率随时间增高,72 h达(43.3±5.0)%;实验组无血清培基中凋亡率达(22.0±2.5)%,对照组(7.0±1.1)%,差异有统计学意义(P<0.01).结论 成功在体外建立稳定表达DMBT1的胆囊癌细胞株,DMBT1在体外抑制胆囊癌细胞增殖,无血清下诱导其凋亡。
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