【摘 要】
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本文从烟草中克隆出CYP71基因,进行生物信息学分析,并在原核细胞中表达出目的蛋白。应用RTPCR,从野生型烟草(Nicotiana tabacum)叶片中克隆出一种CYP450 c DNA序列(CYP71)。
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(No.31071755/C1408)
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本文从烟草中克隆出CYP71基因,进行生物信息学分析,并在原核细胞中表达出目的蛋白。应用RTPCR,从野生型烟草(Nicotiana tabacum)叶片中克隆出一种CYP450 c DNA序列(CYP71)。序列分析表明,烟草CYP71基因ORF长为1545 bp,编码514个氨基酸,基因登录号为KC480444.1。将去除跨膜信号肽及密码子优化后的基因合成后,构建至p ET-30a表达载体,转化到大肠杆菌Rosetta(DE3)中,经IPTG诱导和SDS-PAGE电泳、Western-blot检测,获得与预期一致的49 KDa蛋白质,为进一步研究CYP71基因的抗虫功能奠定了基础。
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