抗鲤疱疹Ⅱ型病毒卵黄抗体制备及其功能鉴定

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为制备抗鲤疱疹Ⅱ型病毒(CyHV-2)的卵黄抗体,探索防治异育银鲫(Carassius auratus gibelio)鳃出血病的新方法和途径,本研究利用原核表达系统产生具免疫原性的重组CyHV-2-ORF72衣壳蛋白,纯化后免疫蛋鸡;二次免疫后采用间接ELISA法抽检免疫蛋的特异性卵黄抗体(IgY)含量,收集抗体效价达到1∶8 000的免疫蛋。将免疫蛋分成全蛋组与蛋黄组,采用微包膜和冷冻干燥技术,分别制成全蛋粉或蛋黄粉,利用Western blot和ELISA技术检测全蛋粉和蛋黄粉中的IgY特异性及效价。将蛋黄粉稀释液与CyHV-2混合后孵育鲤鱼上皮瘤细胞,进行抗体中和试验。以0.15%和0.30%的添加量分别将抗CyHV-2-ORF72的免疫全蛋粉拌入商品饲料制成功能性饲料,投喂已发病的两个池塘的异育银鲫进行生产性治疗试验。结果显示,全蛋粉和蛋黄粉中的IgY均能特异性地结合CyHV-2-ORF72衣壳蛋白,效价达到1∶8 000~1∶16 000;抗CyHV-2-ORF72的IgY与CyHV-2具有较好的亲和力,中和活性高于鼠抗ORF72血清;两个池塘异育银鲫成活率分别达到74.3%和87.6%,远高于对照池的28.3%和31.5%。综上所述,本研究制备的抗CyHV-2-ORF72卵黄抗体可特异性地中和CyHV-2病毒,具较显著的免疫保护作用。
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