【摘 要】
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目的 观察三邻甲苯磷酸酯(TOCP)对人诱导多能干细胞来源的人脑类器官的神经毒性.方法 培养约60 d的人脑类器官随机分为4组,正常对照组、TOCP 1,5和10 mmol·L-1组,每组3个,孵育24 h.CTG法测定人脑类器官细胞存活率,TUNEL法检测人脑类器官细胞凋亡,倒置荧光显微镜实时记录人脑类器官的钙震荡信号,比色法检测总抗氧化能力(T-AOC),还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)和过氧化氢(H2O2)含量及超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽还原酶(GSH-Px)活性
【机 构】
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国民核生化灾害防护国家重点实验室,北京 102205
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目的 观察三邻甲苯磷酸酯(TOCP)对人诱导多能干细胞来源的人脑类器官的神经毒性.方法 培养约60 d的人脑类器官随机分为4组,正常对照组、TOCP 1,5和10 mmol·L-1组,每组3个,孵育24 h.CTG法测定人脑类器官细胞存活率,TUNEL法检测人脑类器官细胞凋亡,倒置荧光显微镜实时记录人脑类器官的钙震荡信号,比色法检测总抗氧化能力(T-AOC),还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)和过氧化氢(H2O2)含量及超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽还原酶(GSH-Px)活性.结果 与正常对照组相比,TOCP 5和10 mmol·L-1组人脑类器官细胞存活率显著降低(P<0.05);TUNEL显色表明,TOCP 5 mmol·L-1组人脑类器官细胞凋亡增加(P<0.01);TOCP 5 mmol·L-1组人脑类器官细胞出现钙震荡信号紊乱,表现为荧光强度持续增强、震荡幅度增加(P<0.05).与正常对照组相比,TOCP 1,5和10 mmol·L-1组人脑类器官H2O2含量均显著升高(P<0.01),10 mmol·L-1组MDA含量显著升高(P<0.01),各组NO水平无显著变化.TOCP 1,5和10 mmol·L-1组T-AOC显著降低(P<0.05,P<0.01),GSH含量下降(P<0.05,P<0.01);TOCP 5和10 mmol·L-1组SOD和GSH-Px活性显著降低(P<0.05,P<0.01).结论 TOCP诱导人脑类器官细胞凋亡,降低人脑类器官的细胞存活率,具有显著神经毒性,其机制可能是通过破坏人脑类器官的钙稳态,使细胞内钙离子浓度升高,氧化应激反应加剧,从而介导了细胞凋亡等损伤发生.
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