背景 目前用细胞免疫的方法治疗视网膜母细胞瘤(RB)成为新的研究热点,肿瘤-睾丸抗原是最具免疫原性的人类肿瘤抗原之一,已用于全身一些肿瘤的免疫治疗,但其对RB治疗作用的研究报道较少.目的 探讨肿瘤-睾丸抗原的New York-esophageal-1(NY-ESO-1)致敏树突状细胞(DCs)诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对RB细胞株HXO-RB44的杀伤作用.方法 用聚合酶链反应(PCR)技术对NY-ESO-1质粒的目的基因片段进行扩增,使用SalI限制酶和EcoRI限制酶进行双酶切,切胶回收DNA片段.将其连接入pDC316质粒,构建pDC316/NY-ESO-1真核表达载体并再进行酶切鉴定.免疫荧光及Western blot 法检测NY-ESO-1蛋白在HXO-RB44细胞株中的表达.Ficoll法分离血获得单个核细胞,通过RPMI 1640重悬,调整细胞密度为1×106个/ml,通过重组人集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白细胞介素4(rhIL-4)诱导培养外周血来源的DCs,通过重组质粒转染DCs,以脂多糖诱导DCs成熟,DCs与淋巴细胞数量比为1∶25的比例混合培养HXO-RB44细胞,通过MTT法检测CTL的增生情况.在培养液中同时加入CTL细胞,MTT法检测HXO-RB44细胞的活力.结果 重组质粒pDC316/NY-ESO-1的目的片段序列与NY-ESO-1基因序列完全相同,酶切鉴定结果与预期一致.Western blot法以及免疫荧光检测结果显示,NY-ESO-1在细胞株HXO-RB44中呈强阳性表达.经rhGM-CSF和rhIL-4成功诱导出的外周血DCs,重组质粒转染后其表型分子分别是HLA-DR为42.1％,CD80为54.2％,CD83为39.7％,CD86为94.8％.MTT法检测表明,pDC316/NY-ESO-1质粒转染的DCs诱导的CTL组的增生能力强于未转染组,致敏的DCs与淋巴细胞比例为1∶100时诱导CTL效果最为显著,与未转染组比较差异有统计学意义(P＜0.05),CTL对肿瘤细胞的杀伤作用明显强于未转染组和无DCs组,且效靶比为75:1时杀伤率最强,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 NY-ESO-1质粒转染DCs诱导的CTL对RB细胞具有特异性杀伤作用,为RB免疫治疗提供了一种新的方法。