论文部分内容阅读
[摘 要] 采用常规离体灌流的十二指肠做标本收缩运动试验，观察不同浓度银杏黄酮对小白鼠离体十二指肠平滑肌的作用，记录加入银杏黄酮前后小肠平滑肌的收缩活动特征及变化规律。
[关键词] 银杏黄酮 十二指肠平滑肌 收缩活动 小白鼠
本实验旨在观察记录银杏黄酮对肠道平滑肌的影响，了解不同浓度银杏黄酮对肠道平滑肌的影响，探讨银杏黄酮对肠道平滑肌的作用情况。
1、材料与方法
1.1材料
1.1.1实验动物
健康成年小白鼠，鼠龄80～100d，体重15～35g，雌雄不限。
1.1.2实验仪器。BL-420F生物机能实验系统；JZ-1型肌肉张力换能器；恒温灌流浴槽，恒温于37.5℃；L型通气钩，氧气泵，常用手术器械等。
1.1.3实验药品和试剂。银杏黄酮（浓度分别为10mg/100ml,25mg/100ml,50mg/100ml,75mg/100ml,100mg/100ml,150mg/100ml,300mg/100ml,500mg/100ml。银杏黄酮≧224%，银杏苦内酯≧213%，）；新鲜台氏液(Tyrode)（NaCl129.0mmol/L，KCl4.0mmol/L，NaH2PO4·2H2O0.9mmol/L，NaHCO320.0mmol/L，CaCl21.8mmol/L，MgSO40.5mmol/L，葡萄糖5.5mmol/L，胰島素16.67nkat/kg）
1.2实验方法
1.2.1材料准备。恒温灌流水浴槽水温保持在38±0.5℃,浴槽内盛37.5℃台氏液20ml，氧气泵用橡皮管与L型通气钩相连。将健康小白鼠断头处死，剖开腹腔,迅速暴露十二指肠，剪成3-4cm长的十二指肠段制成离体标本。取2段放入37.5℃台氏液内，同时通入氧气备用【3】。
1.2.2仪器的准备。在肠段两端各扎一条丝线，一端系于张力换能器小孔上，另一端连于通气钩上，以便固定肠肌。将通气钩连同肠肌放入恒温灌流浴槽的内浴槽中，采用氧气泵通入空气。张力换能器与BL-420F生物机能实验系统电脑通道Ⅱ连接。选择实验项目中“消化道平滑肌的生理特性”实验模块，设置控制参数：灵敏度500uV/cm,时间常数3s,高频滤波20Hz，波形速度为1.00S/div。检测指标有频率、振幅，各指标均以5min作为一个单位时间，以便观察、对比和计算。
预灌流一段时间(约10～20min)，标本活动稳定后，记录运动性能指标，为正常对照曲线。实验采用分离加入的方法，加入一种药物并观察其效果后，用37～38℃台氏液反复灌洗，待肠段的活动基本恢复并稳定后(一般5min以上)，再加入另不同浓度EGB。记录、处理和存储实验数，重复实验10次。
1.2.3给药.(1)对照组：将离体肠段固定并连接好,待标本活动稳定后,记录结肠段的机械活动作为正常对照曲线。(2)加药组：记录完正常对照曲线后,在药槽20ml灌流液中按照浓度梯度分别加入不同浓度的银杏黄酮各2ml。
1.2.4统计学处理.以给药前5min的平均值作为对照值，并以给药后5min的平均值作为效应值。记录给药前后十二指肠肠平滑肌的收缩幅度和张力，并换算成变化百分率：(效应值-对照值)/对照值×100%，负值为抑制、正值为兴奋；验数据以均值±标准差（x±s）表示，采用单因素方差（ANOVA）分析判断组间差异的显著性。
2、结果
2.1不同浓度银杏黄酮对小鼠离体小肠收缩的影响
本组小鼠小肠段收缩幅度和频率结果见表1、表2。
表1不同浓度银杏黄铜对平滑肌收缩频率的影响（百分比）
结果表明：在正常台氏液中加入EGB使小白鼠小肠平滑肌收缩频率有兴奋作用。10—150mg/100ml的银杏黄铜对小肠收缩频率只有轻微的兴奋作用，而300mg/100ml的EGB对小肠平滑肌收缩频率有非常显著的兴奋作用，并且标准差与对照组有比较明显的差异（由0.01升到0.03）。浓度超过300mg/100ml之后，EGB对小肠平滑肌收缩频率的兴奋作用有所下降（频率由0.125±0.03降到0.116±0.01）。
由数据分析显著：银杏黄铜对小肠平滑肌的收缩频率主要起兴奋作用，300mg/100ml的银杏黄铜对小肠平滑肌的收缩频率有最明显的兴奋作用。
表2不同浓度EGB对平滑肌收缩波幅的影响（百分比）
结果表明：银杏黄铜对小白鼠小肠平滑肌收缩波幅有兴奋和抑制作用，兴奋相对明显。10—300mg/100ml的银杏黄铜对小肠平滑肌有兴奋作用，10mg/100ml与100mg/100ml浓度的EGB有明显兴奋作用（从正常的收缩幅度百分率：0. 092±0.03升到0.134±0.04以及0.125±0.02，最大值由0.095升到0.138、0.127，提高了45.2%和33.7%）。但随着浓度升高（75mg/100ml之后），对小肠平滑肌的兴奋作用下降，当EGB的浓度为500mg/100ml时，已经出现了抑制作用。为此，推测银杏黄铜起抑制作用的开始浓度处于300--500mg/100ml之间，偏500mg/100ml。
由数据分析得出：不同浓度银杏黄铜对小肠平滑肌收缩波幅有兴奋和抑制作用，兴奋比较明显。10 mg/100ml 的EGB对小肠平滑肌收缩波幅的兴奋作用最强，低浓度的EGB对小肠平滑肌收缩波幅起兴奋作用较明显。■
[关键词] 银杏黄酮 十二指肠平滑肌 收缩活动 小白鼠
本实验旨在观察记录银杏黄酮对肠道平滑肌的影响，了解不同浓度银杏黄酮对肠道平滑肌的影响，探讨银杏黄酮对肠道平滑肌的作用情况。
1、材料与方法
1.1材料
1.1.1实验动物
健康成年小白鼠，鼠龄80～100d，体重15～35g，雌雄不限。
1.1.2实验仪器。BL-420F生物机能实验系统；JZ-1型肌肉张力换能器；恒温灌流浴槽，恒温于37.5℃；L型通气钩，氧气泵，常用手术器械等。
1.1.3实验药品和试剂。银杏黄酮（浓度分别为10mg/100ml,25mg/100ml,50mg/100ml,75mg/100ml,100mg/100ml,150mg/100ml,300mg/100ml,500mg/100ml。银杏黄酮≧224%，银杏苦内酯≧213%，）；新鲜台氏液(Tyrode)（NaCl129.0mmol/L，KCl4.0mmol/L，NaH2PO4·2H2O0.9mmol/L，NaHCO320.0mmol/L，CaCl21.8mmol/L，MgSO40.5mmol/L，葡萄糖5.5mmol/L，胰島素16.67nkat/kg）
1.2实验方法
1.2.1材料准备。恒温灌流水浴槽水温保持在38±0.5℃,浴槽内盛37.5℃台氏液20ml，氧气泵用橡皮管与L型通气钩相连。将健康小白鼠断头处死，剖开腹腔,迅速暴露十二指肠，剪成3-4cm长的十二指肠段制成离体标本。取2段放入37.5℃台氏液内，同时通入氧气备用【3】。
1.2.2仪器的准备。在肠段两端各扎一条丝线，一端系于张力换能器小孔上，另一端连于通气钩上，以便固定肠肌。将通气钩连同肠肌放入恒温灌流浴槽的内浴槽中，采用氧气泵通入空气。张力换能器与BL-420F生物机能实验系统电脑通道Ⅱ连接。选择实验项目中“消化道平滑肌的生理特性”实验模块，设置控制参数：灵敏度500uV/cm,时间常数3s,高频滤波20Hz，波形速度为1.00S/div。检测指标有频率、振幅，各指标均以5min作为一个单位时间，以便观察、对比和计算。
预灌流一段时间(约10～20min)，标本活动稳定后，记录运动性能指标，为正常对照曲线。实验采用分离加入的方法，加入一种药物并观察其效果后，用37～38℃台氏液反复灌洗，待肠段的活动基本恢复并稳定后(一般5min以上)，再加入另不同浓度EGB。记录、处理和存储实验数，重复实验10次。
1.2.3给药.(1)对照组：将离体肠段固定并连接好,待标本活动稳定后,记录结肠段的机械活动作为正常对照曲线。(2)加药组：记录完正常对照曲线后,在药槽20ml灌流液中按照浓度梯度分别加入不同浓度的银杏黄酮各2ml。
1.2.4统计学处理.以给药前5min的平均值作为对照值，并以给药后5min的平均值作为效应值。记录给药前后十二指肠肠平滑肌的收缩幅度和张力，并换算成变化百分率：(效应值-对照值)/对照值×100%，负值为抑制、正值为兴奋；验数据以均值±标准差（x±s）表示，采用单因素方差（ANOVA）分析判断组间差异的显著性。
2、结果
2.1不同浓度银杏黄酮对小鼠离体小肠收缩的影响
本组小鼠小肠段收缩幅度和频率结果见表1、表2。
表1不同浓度银杏黄铜对平滑肌收缩频率的影响（百分比）
结果表明：在正常台氏液中加入EGB使小白鼠小肠平滑肌收缩频率有兴奋作用。10—150mg/100ml的银杏黄铜对小肠收缩频率只有轻微的兴奋作用，而300mg/100ml的EGB对小肠平滑肌收缩频率有非常显著的兴奋作用，并且标准差与对照组有比较明显的差异（由0.01升到0.03）。浓度超过300mg/100ml之后，EGB对小肠平滑肌收缩频率的兴奋作用有所下降（频率由0.125±0.03降到0.116±0.01）。
由数据分析显著：银杏黄铜对小肠平滑肌的收缩频率主要起兴奋作用，300mg/100ml的银杏黄铜对小肠平滑肌的收缩频率有最明显的兴奋作用。
表2不同浓度EGB对平滑肌收缩波幅的影响（百分比）
结果表明：银杏黄铜对小白鼠小肠平滑肌收缩波幅有兴奋和抑制作用，兴奋相对明显。10—300mg/100ml的银杏黄铜对小肠平滑肌有兴奋作用，10mg/100ml与100mg/100ml浓度的EGB有明显兴奋作用（从正常的收缩幅度百分率：0. 092±0.03升到0.134±0.04以及0.125±0.02，最大值由0.095升到0.138、0.127，提高了45.2%和33.7%）。但随着浓度升高（75mg/100ml之后），对小肠平滑肌的兴奋作用下降，当EGB的浓度为500mg/100ml时，已经出现了抑制作用。为此，推测银杏黄铜起抑制作用的开始浓度处于300--500mg/100ml之间，偏500mg/100ml。
由数据分析得出：不同浓度银杏黄铜对小肠平滑肌收缩波幅有兴奋和抑制作用，兴奋比较明显。10 mg/100ml 的EGB对小肠平滑肌收缩波幅的兴奋作用最强，低浓度的EGB对小肠平滑肌收缩波幅起兴奋作用较明显。■