【摘 要】
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目的探讨短发夹RNA（shRNA）靶向沉默Ethergo-go 1（Eag1）钾通道对骨肉瘤MG-63细胞增殖、细胞周期及cyclin D1/E表达的影响。方法使用成功构建的Ad5-Eag1-shRNA表达载体转染MG-63
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目的探讨短发夹RNA（shRNA）靶向沉默Ethergo-go 1（Eag1）钾通道对骨肉瘤MG-63细胞增殖、细胞周期及cyclin D1/E表达的影响。方法使用成功构建的Ad5-Eag1-shRNA表达载体转染MG-63细胞（抑制组）,同时设转染无义序列（Ad5-Control-shRNA）的空转染组及不进行任何处理的对照组。采用逆转录聚合酶链式反应和Western blotting检测Ad5-Eag1-shRNA转染骨肉瘤MG-63细胞后的Eag1 mRNA和蛋白水平,分别采用CCK-8法和克隆形成实验检测各组的细胞增殖情况,流式细胞仪和Western blotting分别检测各组的细胞周期变化和细胞周期蛋白（cyclin D1和cyclin E）的蛋白水平。建立裸鼠骨肉瘤异种移植模型并测量各组裸鼠肿瘤体积的变化情况。结果抑制组的Eag1 mRNA和蛋白水平均低于空转染组和对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;与其余两组相比,抑制组的细胞增殖、克隆形成数、S期细胞比例及细胞周期蛋白水平均降低,而G0/G1期细胞比例升高,以上差异均有统计学意义（P<0.05）。抑制组裸鼠的瘤体积小于空转染组和对照组（P<0.05）。结论通过shRNA抑制Eag1基因表达可抑制MG-63细胞的增殖并诱导G0/G1期阻滞,可能与调控cyclin D1/E通路有关,有望成为骨肉瘤治疗和诊断的新靶点。
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