【摘 要】
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目的构建人胱蛋白酶抑制剂C(Cystatin C)的表达载体并进行蛋白的初步纯化.方法用逆转录聚合酶链反应从人胎盘组织中扩增含有380 bp的Cystatin C cDNA基因片段,并将其插入到pP
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目的构建人胱蛋白酶抑制剂C(Cystatin C)的表达载体并进行蛋白的初步纯化.方法用逆转录聚合酶链反应从人胎盘组织中扩增含有380 bp的Cystatin C cDNA基因片段,并将其插入到pPIC9质粒中.携带有Cystatin C片段的pPIC9质粒转化毕氏酵母菌菌株GS115,醇氧化脱氢酶1(AOX1)启动子被甲醇诱导而产生可溶性Cystatin C.重组Cystatin C采用Hitrap-SP阳离子交换柱进行初步纯化.结果核酸序列测定与预期一致, Cystatin C表达水平达到16 mg/L,约占菌体总可溶性蛋白的60%,蛋白纯化回收率为40.5%. Cystatin C在表达体系中至少可稳定3 d.结论 Cystatin C在毕氏酵母菌胞外有较高水平的分泌,既可作为抗原免疫动物获取抗体,也可作为测定的标准品,为今后进行国产Cystatin C免疫学测定试剂研制奠定了基础.
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