观察重组慢病毒Lv-hTERTp-TK与Lv-hTERTp-tumstatin在肝癌HepG2细胞中的靶向表达，探讨二者联合在体内外对HepG2细胞的抑制作用。
方法用不同MOI重组慢病毒Lv-hTERTp-TK、Lv-hTERTp-tumstatin转染肝癌细胞HepG2、正常肝细胞L02，72 h后荧光显微镜观察转染情况；逆转录PCR检测TK、tumstatin mRNA在HepG2、L02细胞中的表达；四甲基偶氮唑蓝法观察两种细胞增殖情况；流式细胞术检测两种细胞凋亡情况；RT-PCR、Western blot检测HepG2细胞bcl-2、血管内皮生长因子（VEGF）mRNA和蛋白的表达；将HepG2细胞接种于30只BALB/c裸鼠皮下，构建动物移植瘤模型，随机分为5组，空白对照组、空载体组、tumstatin组、TK组及联合组，每组6只，瘤内分别注射磷酸盐缓冲溶液、空载体慢病毒Lv-hTERTp-eGFP、重组慢病毒Lv-hTERTp-tumstatin、重组慢病毒Lv-hTERTp-TK和重组慢病毒Lv-hTERTp-tumstatin+Lv-hTERTp-TK；4周后处死裸鼠，观察各组移植瘤体积及质量的变化；行HE染色进行各组肿瘤组织及主要脏器的形态学观察；免疫组织化学法检测肿瘤内微血管密度；TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡率。数据采用方差分析。
结果转染后TK、tumstatin基因在HepG2细胞中特异表达，在L02细胞中无表达。TK组、tumstatin组及联合组均对HepG2细胞生长有抑制作用，联合组抑制率明显高于单基因作用组（F = 731.679，P < 0.05），各组L02细胞抑制率差异无统计学意义（F = 0.774，P > 0.05）；联合组HepG2细胞总凋亡率达72.61%±3.29%，明显高于TK组（53.63%±3.06%）、tumstatin组（45.13%±2.15%）、空白对照组（13.29%±1.15%）（F = 365.022，P < 0.05），各组L02细胞凋亡率差异无统计学意义（F = 0.391，P > 0.05）；与对照组相比，实验组HepG2细胞bcl-2及VEGF表达水平均下降（bcl-2 mRNA：F = 322.780，P < 0.05；VEGF mRNA：F = 561.136，P < 0.05；bcl-2蛋白：F = 34.203，P < 0.05；VEGF蛋白：F = 32.988，P < 0.05），其中联合组bcl-2及VEGF表达水平均低于单基因组（P值均<0.05）。tumstatin组、TK组和联合组的抑瘤率分别为40.68％、44.96％和72.09％，联合组抑瘤效果最显著（P < 0.05）；HE染色显示联合组肿瘤细胞凋亡最明显。与空白对照组相比，其他各组裸鼠体内肝、脾和肾等主要脏器组织形态学均无显著变化；空白对照组、空载体组、TK组、tumstatin组和联合组的微血管密度分别为28.4±4.28、29.2±2.59、20.8±3.35、14.2±4.87、5.8±2.77，tumstatin组抗肿瘤血管生成作用强于TK组（P < 0.05），且联合组作用最明显（P < 0.05）。联合组肿瘤细胞凋亡率为70.11%±5.67％，明显高于tumstatin组（23.75%±5.21％）、TK组（48.30%±4.99％）、空白对照组（3.89%±1.13％）（P < 0.05），其中TK组的促凋亡作用较tumstatin组显著（P < 0.05）。
结论hTERT启动子驱动TK、tumstatin在HepG2细胞中靶向表达，两种基因联合在体内外显著抑制HepG2细胞增殖和促进HepG2细胞凋亡，作用明显强于单基因，其机制可能与bcl-2及VEGF表达下调有关。