l-Caldesmon腺病毒的构建及其在ECV304细胞中的表达

来源 :第三军医大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：huli890615

【摘要】

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目的构建含有1-Caldesmon基因的重组腺病毒表达载体。方法以含有1-Caldesmon全长编码序列的pCGN—CaD为模板，PCR扩增1-Caldesmon，T—A克隆，酶切亚克隆到穿梭质粒pAdtrack-CMV上，

【作者】

：

褚志刚张家平张琼向飞宋华培黄跃生

【机构】

：

第三军医大学西南医院全军烧伤研究所

【出处】

：

第三军医大学学报

【发表日期】

：

2007年12期

【关键词】

：

腺病毒载体 1-Caldesmon ECV304细胞 adenovirus vector L-Caldesmon ECV304

【基金项目】

：

国家重点基础研究发展规划项目（“973”项目）（2005CB522601）,国家自然科学基金重点项目（30430680）

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目的构建含有1-Caldesmon基因的重组腺病毒表达载体。方法以含有1-Caldesmon全长编码序列的pCGN—CaD为模板，PCR扩增1-Caldesmon，T—A克隆，酶切亚克隆到穿梭质粒pAdtrack-CMV上，在BJ5183菌内和pAdeasy同源重组，筛选阳性克隆，酶切鉴定，线性化后脂质体法转染HEK293细胞进行包装、扩增，得到含有1-Caldesmon基因的重组腺病毒，根据报告基因GFP测定病毒滴度。将收集的病毒液感染ECV304细胞，Western blot检测1-Caldesmon

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