【摘 要】
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目的 克隆人TIPE2基因启动子区及一系列5′截短片段,并鉴定其DNA表达调控区域.方法 采用PCR技术从人基因组DNA中克隆扩增TIPE2基因5′上游1252 bp启动子序列并对该片段5′端
【机 构】
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山东大学医学院免疫学研究所,济南,250012;山东省血液中心,济南,250014;山东省警官总医院检验科,济南,250002
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目的 克隆人TIPE2基因启动子区及一系列5′截短片段,并鉴定其DNA表达调控区域.方法 采用PCR技术从人基因组DNA中克隆扩增TIPE2基因5′上游1252 bp启动子序列并对该片段5′端的截短,分别瞬时转染人卵巢癌来源细胞系SKOV3,通过双萤光素酶活性的检测鉴定其启动子活性及表达调控区域.结果 克隆扩增的8个TIPE2基因启动子截短片段经测序证明无误;TIPE2-pGL4-P1重组质粒双萤光素酶活性检测显示其具有明显的启动子活性,约为pGL4-Basic的7.9倍;5′系列截短片段重组质粒的启动子活性检测显示,与1252bp片段相比,TIPE2上游-965～-593bp、-501～-390bp缺失,启动子活性分别升高6.38、7.82倍;-593～-501bp的缺失,使-501～+79 bp片段相对于-593～+79 bp片段的启动子活性降低2.04倍.结论 人TIPE2基因上游1252 bp区域有明显的启动子活性,该片段内存在2个潜在的负性调控区和1个潜在的正性调控区.
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