PKC/HSP70通路介导白藜芦醇对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

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目的:探讨白藜芦醇(resveratrol,RSVL)对心肌细胞缺氧/复氧损伤(anoxia/reoxygenation injury,ARI)的保护作用及机制。方法:分离、纯化SD乳鼠原代心肌细胞,建立缺氧/复氧损伤模型,采用随机数字量表法分为6组:正常对照(CON)组、ARI组、ARI+不同浓度RSVL(25,50,75μmol·L-1)预处理组、ARI+RSVL(75μmol·L-1)+PKC抑制剂白屈菜红碱(1μmol·L-1)组。倒置相差显微镜观察心肌细胞生长形态,自发搏动频率和节律;Hoechst 33258染色计算细胞凋亡率;比色法测定细胞培养液中LDH、CK漏出量及细胞内Ca2+-ATPase活性;荧光分光光度计测定细胞内游离钙离子浓度;Western blot检测心肌细胞PKC、HSP70及Ca2+-ATPase蛋白水平。结果 :不同浓度RSVL与ARI组相比,心肌细胞折光性好,搏动有力而规则,频率在90115次/分(P<0.01);呈剂量依赖性减少细胞凋亡(P<0.01),降低培养液中LDH和CK漏出量(P<0.05或P<0.01),提高心肌细胞Ca2+-ATPase活性及降低细胞内[Ca2+]i量(P<0.05或P<0.01);心肌细胞PKC、HSP70及Ca2+-ATPase蛋白表达增加(P<0.05或P<0.01)。而RSVL的保护作用可被PKC抑制剂白屈菜红碱所取消(P<0.05或P<0.01)。结论:RSVL可能通过PKC/HSP70通路产生对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。
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