【摘 要】
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构建真核表达载体pcDNA3.1（-）-Smad4,通过稳定转染建立高效表达Smad4的人胃癌细胞系.利用PCR扩增出人Smad4全长基因的cDNA编码区序列,使用基因重组技术将其克隆到真核表达载体p
【机 构】
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上海复旦大学附属中山医院青浦分院,上海交通大学医学院附属瑞金医院
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构建真核表达载体pcDNA3.1（-）-Smad4,通过稳定转染建立高效表达Smad4的人胃癌细胞系.利用PCR扩增出人Smad4全长基因的cDNA编码区序列,使用基因重组技术将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,得到重组表达质粒pcDNA3.1-Smad4.双酶切及测序鉴定后,利用脂质体法将其转染入人胃癌MKN28细胞,G418加压筛选后得到阳性克隆.通过流式细胞术、免疫荧光及Western blot检测Smad4在细胞系中的表达情况.经测序及双酶切鉴定,pcDNA3.1-Smad4真核表达载体pc
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