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根据GenBank上鸡β-actin、TNF-α的基因序列设计引物，应用逆转录-聚合酶链式反应（RT—PCR）技术克隆获得了pactin和TNF-α基因，采用pactin为内参的半定量方法检测TNF-αmRNA在鸡柔嫩艾美球虫免疫前后不同时间的表达情况，以探讨TNF-α基因的表达动态与柔嫩艾美球虫免疫的关系。结果显示，TNF-α基因在两次免疫期间的表达量整体上呈现双峰模式，首免后第9d达到一个高峰，二免后第7d达到另一个高峰。结果表明，TNF-α在抗球虫感染中有一定的作用。