观察分别及联合抑制Rac及Rho通路后3D水凝胶中恶性胶质瘤细胞的侵袭迁移运动形式与整合素表达的变化。
方法应用脂质体介导pCMVLifeAct-TagGFP2质粒转染U87细胞，将转染后细胞分为NSC23766处理组、Y-27632处理组、NSC23766和Y-27632联合处理组、空白对照组，前3组分别加入100 nmol/mL NSC23766、10 nmol/mL Y-27632、100 nmol/mL NSC23766+10 nmol/mL Y-27632，空白对照组加入等量培养基。将4组细胞在水凝胶中进行3D培养，共聚焦显微镜观察4组中类圆形细胞、梭形细胞的组成及间质运动和变形虫运动形式的转换；将接种了4组细胞的水凝胶注入细胞趋化载玻片中，于活细胞工作站观察4组细胞的侵袭迁移运动形式并计算运动速度、运动距离；免疫荧光染色观察4组细胞整合素αVβ3的表达。
结果3D水凝胶培养的U87细胞具有类梭形、类圆形2种形态，相应地表现为间质运动和变形虫样运动形式。与空白对照组比较，NSC23766处理组中类圆形细胞所占比例较高，Y-27632处理组中梭形细胞所占比例较高，差异均有统计学意义(P<0.05)。NSC23766处理组细胞的间质-变形虫运动(MAT)转换率为50.0%，Y-27632处理组变形虫-间质运动(AMT)转换率为42.8%。趋化实验结果显示NSC23766处理组、空白对照组、Y-27632处理组、NSC23766和Y-27632联合处理组细胞的运动速度和运动距离依次降低，差异有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光染色检测显示Y-27632处理组细胞整合素αVβ3表达显著高于其他3组，空白对照组细胞整合素αVβ3表达显著高于NSC23766处理组和联合处理组。
结论3D水凝胶可以作为U87细胞培养及三维形态观察的良好基质，Rac1与RohA通路靶向抑制剂的联合应用可作为控制脑胶质瘤播散的策略。