观察转甲状腺素蛋白(TTR)对视网膜色素上皮细胞(RPEC)增生及视网膜微血管内皮细胞(RMVEC)增生、迁移的影响并考察其与VEGF mRNA表达的关系,
方法通过加入外源性TTR考察TTR对RPEC增生的影响;利用小干扰RNA (siRNA)沉默视网膜色素上皮自身表达的TTR,使用Western blot检测沉默效果;RT-PCR法考察沉默后VEGF mRNA的变化;通过transwell共培养体系,观察TTR沉默前后RMVEC增生、迁移行为的改变。两组间比较行t检验,三组间两两比较用SNK法。
结果MTT比色法显示,4 μmol/L组吸光度(A)值(0.36±0.01)低于0 μmol/L组A值(0.72± 0.02),差异有统计学意义(t=18.08 ,P<0.0001),TTR对RPEC的增生有抑制作用;Western blot法检测TTR的表达抑制,实验组与对照组间差异有统计学意义(P>0.05),TTR的表达被有效沉默;沉默TTR表达后检测VEGF mRNA表达,空白对照组、阴性对照组、实验组3个组间两两比较,差异均无统计学意义(P>0.05),TTR的沉默表达并未在mRNA水平上引起VEGF的表达改变;48 h RPEC-RMVEC共培养细胞增生实验结果显示,RMVEC增生数NC siRNA组[(362.8±17.7)个]和TTR siRNA组[(252.4± 13.92)个]间差异有统计学意义(t=4.901,P=0.0012),沉默TTR表达会抑制RMVEC的增生能力。48 h RPEC-RMVEC共培养细胞迁移实验结果显示,RMVEC向外迁移数NC siRNA组[(229.0±14.9)个]和TTR siRNA组[(147.8±12.2)个]比较,差异有统计学意义(t=4.213 ,P=0.0029 )。沉默TTR表达会抑制RMVEC的迁移能力。
结论TTR能抑制RPEC增生、促进RMVEC增生和迁移,这一现象并非通过VEGF实现,其机制值得进一步研究。(中华眼科杂志,2016,52:856-860)