【摘 要】
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目的 构建微小脲原体UP3-00235基因的原核表达载体,并对其编码蛋白质进行生物信息分析. 方法 利用Primer Premier 5.0软件设计引物,利用PCR方法克隆UP3-00235基因(片段大小为
【机 构】
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河北北方学院医学检验学院,河北张家口075000;河北北方学院临床检验诊断学重点实验室;河北北方学院医学检验学院,河北张家口,075000
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目的 构建微小脲原体UP3-00235基因的原核表达载体,并对其编码蛋白质进行生物信息分析. 方法 利用Primer Premier 5.0软件设计引物,利用PCR方法克隆UP3-00235基因(片段大小为483 bp).使用限制性核酸内切酶双酶切UP3-00235基因和pGEX-6p-2载体质粒,室温下用T4连接酶连接2.5h,连接后转人大肠埃希菌感受态中,IPTG诱导GST-UP3-00235蛋白的表达,并对其进行生物信息学分析. 结果 成功构建了pGEX-6p-2-UP3-00235重组质粒,测序后与NCBI中已录入的Ureaplasma parvum strain hebnu uu3序列进行比对,同源性l00％.重组质粒转染大肠埃希菌后经IPTG诱导3h,表达出GST-UP3-00235融合蛋白,与预期大致相符.经生物信息学软件分析,UP3-00235基因编码蛋白质含有160个氨基酸,分子式为C823H1339N241O251S3,相对分子质量为18.73×103,等电点(PI)为9.43.二级结构中含有α-螺旋、β-折叠、无规则卷曲,分别占59.38％、17.50％和23.12％.无β-转角和跨膜区域,但含有信号肽区域.高级结构分析显示,UP3-00235基因编码蛋白分子与蛋白库中3r3t.1蛋白的B链相似性高,为36.56％;结构及功能预测显示该蛋白为UU-554,rpS6,与其相邻的蛋白分别为rpS18和rpL9. 结论 成功构建了GST-UP3-00235原核表达载体,并诱导表达45×103的目的蛋白,生物信息学预测该蛋白含有信号肽,属于核蛋白家族,为进一步研究微小脲原体UP3-00235基因的功能奠定了基础.
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