【摘 要】
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目的 探讨牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,Pg）通过膜受体分子-溶质运载蛋白7家族成员11（solute cartier family 7 member 11,SLC7A11,又称xCT）调节食管鳞癌细胞谷氨酰胺代谢的作用及机制。方法 基于人类全基因组库筛选Pg感染食管鳞癌细胞所需的宿主因子；运用免疫共沉淀、NanoBiT?活细胞实时蛋白相互作用和免疫荧光实验探索
【机 构】
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河南科技大学临床医学院河南科技大学第一附属医院河南科技大学肿瘤研究所河南省肿瘤表观遗传重点实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目（No.82073029）；
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目的 探讨牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,Pg）通过膜受体分子-溶质运载蛋白7家族成员11（solute cartier family 7 member 11,SLC7A11,又称xCT）调节食管鳞癌细胞谷氨酰胺代谢的作用及机制。方法 基于人类全基因组库筛选Pg感染食管鳞癌细胞所需的宿主因子；运用免疫共沉淀、NanoBiT?活细胞实时蛋白相互作用和免疫荧光实验探索Pg的主要毒力因子鞭毛蛋白（fimbriae, FimA）和宿主细胞受体分子xCT之间的相互作用关系；构建xCT基因敲除小鼠模型，Pg口腔灌胃4周后剥离小鼠食管组织，利用RNAscope?原位杂交检测小鼠食管黏膜Pg的载菌量；采用qRT-PCR、Western blot和还原型/氧化型谷胱甘肽试剂盒测定Pg感染对食管癌细胞内谷氨酰胺代谢及其合成酶表达的影响。结果 全基因组筛选测序分析及细胞活力测定结果表明，xCT能够增强Pg在胞内的定殖从而促进食管癌细胞增殖；免疫共沉淀、NanoBiT?实验和免疫细胞荧光实验结果表明，xCT与Pg鞭毛蛋白FimA可直接结合并相互作用；体内实验结果表明，xCT基因敲除小鼠食管上皮中Pg载菌量显著低于野生型小鼠（P＜0.01）;qRT-PCR、Western blot和还原型/氧化型谷胱甘肽测定发现，感染Pg后食管癌细胞的谷氨酰胺合成酶（glutaminase-1,GLS1）以及还原型/氧化型谷胱甘肽比率显著高于未感染组，差异具有统计学意义（均P＜0.01）。结论 xCT是Pg入侵食管癌细胞的重要受体分子之一；Pg入胞后能显著增强肿瘤细胞谷氨酰胺代谢。上述研究为食管癌的病因学和防治策略提供了理论依据。
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