【摘 要】
：
目的：构建荧光实时定量PCR(FQ-PCR)标准品测定铜绿假单胞菌oprⅠ基因,以此测定铜绿假单胞菌菌量.方法：以铜绿假单胞菌的oprI基因为目的基因设计探针引物,提取细菌基因组DNA,与pMD18-TVector连接并转化到大肠杆菌中.用氨卞青霉素筛选出白色菌落,提取含目的基因质粒,并用HindⅢ限制酶进行线性化处理,通过直接PCR、OD值测定及DNA片段测序鉴定其特异性.根据OD值确定浓度,制
【机 构】
：
湖南省人民医院儿科 湖南省人民医院检验科
【出 处】
：
第二届全国现代免疫诊断技术学术研讨会
论文部分内容阅读
目的：构建荧光实时定量PCR(FQ-PCR)标准品测定铜绿假单胞菌oprⅠ基因,以此测定铜绿假单胞菌菌量.
方法：以铜绿假单胞菌的oprI基因为目的基因设计探针引物,提取细菌基因组DNA,与pMD18-TVector连接并转化到大肠杆菌中.用氨卞青霉素筛选出白色菌落,提取含目的基因质粒,并用HindⅢ限制酶进行线性化处理,通过直接PCR、OD值测定及DNA片段测序鉴定其特异性.根据OD值确定浓度,制备FQ-PCR梯度浓度参考标准品,做出标准曲线,检测各样品菌菌量.
结果：铜绿假单胞菌oprI基因的目的片段成功制备,获得稳定的重组质粒,保持了目的片段的特异性和序列完整性,并获得很好的标准曲线(相关系数0.994),成功检测了铜绿假单胞菌标准菌株、培养株的菌量,而大肠杆菌及阴性对照无扩增.
结论：成功构建FQ-PCR检测铜绿假单胞菌oprⅠ基因的定量参考标准,荧光实时定量法可以快速检测铜绿假单胞菌.
其他文献
随着科技发展的日新月异，整合了现代多媒体教学优势的交互式电子白板，作为一种新的教育技术，以其鲜明的教学特点、丰富的教学内容、形象生动的教学情境，促进了教育技术的信息化，有效地改进了教学过程中教与学的活动方式。我县“班班通”工程的实施，更让这一新的教学手段运用常态化。语文教师如果能充分发挥电子白板的辅助教学优势，将更有利于实现课堂教学方式的变革和自身专业化的成长。现结合本人这几年在语文教学研究中使用
随着教学改革的不断深入，我们的语文课堂发生了许多的变化，教学评价也成为教学活动的一个重要环节。它对课程的实施有很强的导向、激励和反馈作用。那么，如何调动学生积极的情感，让他们带着热情与激情进入课堂？相信课堂评价可以成为开启学生们快乐学习之门的金钥匙。下面就字词学习为例，谈谈我对教学评价的一些见解： 一、教学评价与新颖的设计——相得益彰 理性思维的开端是好奇心，有好奇心是学生理性能力觉醒的一个征
课堂教学是教师完成其“传道”、“授业”、“解惑”任务的主要场所，是学生完成学业，发展智力，丰富情感，形成高尚审美情操的主要阵地。课堂教学时间是有限的，如何在有限的时间内既达成教学目标，又能让学生多学，这是教师们一直在探究的课题。 一、有效备课，是提高课堂教学效率的前提 1.认真研读课程标准、教参、教材。在备课之前，我认真研读语文课程标准对每一学段教学的要求，然后认真阅读教师用书及教材，了解每个
英语阅读是学习英语的有效输入手段，英语阅读策略是英语学习策略的重要组成部分，也是《英语课程标准》规定的课程目标之一。在英语阅读教学中，学生不仅通过阅读获取信息，扩大词汇量，更重要的是能从中习得阅读策略，从而达到阅读能力的整体提高。 然而，初中阅读教学仍存在很多问题。有些教师对英语阅读教学的理解比较狭隘，把阅读材料当作语法知识和词汇的载体，重知识点的分析而轻语篇的整体理解；重阅读的结果而轻获取信息
由于教材的几经变更，教师的教与学也随着改进，教学十多年来，笔者饱尝了生物教学的酸甜苦辣，也总结了不少经验和方法，与各位同仁探讨和提升。 一、转变教师角色、树立学生的主体地位 新课程要求学生在教师的指导下自主完成、独立制作、研究新问题的能力，新课程又让教师的教学能力、应变能力、实际能力、适应能力进一步提升。学生开展新课题研究工作的关键取决于教师对研究课题的内容、过程和方法的熟悉程度。因此，要想有
一、在英语课堂中应用多媒体的必要性 1.多媒体所提供的交互性有利于激发学生的学习兴趣 发挥人机交互、立即反馈是多媒体的显著特点，是任何其他媒体所没有的。它能够有效地激发学生的学习兴趣，使学生产生强烈的学习欲望，从而形成学习动机。交互性这个特点使得多媒体不仅是教学的手段方法，而且成为改变传统课堂模式乃至教学思想的一个重要因素。 2.多媒体的合理运用是提高英语能力的有效手段 多媒体教学在英语教
教学活动是借助于一定的手段、工具展开的。教学活动的具体过程、组织方式以及质量效益等都和教学活动中使用的工具密切相关。而多媒体教学是沟通教师与学生之间，传输教学信息的通道。运用电教媒体，可以让学生主动参与自主运用，促进学习的主动性和积极性。 一、创设情境，激发学生学习兴趣 美国心理学家布鲁纳说：“学习的最好刺激乃是对所学材料的兴趣，要想使学生上好课，就得千方百计点燃学生心灵上的兴趣之火。”兴趣是
现阶段，我国中等职业学校计算机应用专业普遍开设了计算机组装与维修课程。这门课程是一门理论与实践二者紧密结合、注重动手能力和实践能力培养、应用性和操作性很强的课程。但在现阶段的教学过程中，原有的教学模式和教学方法存在诸多弊端。如何选用科学的教学法，切实提高学生动手能力和解决实际问题的能力，已经成为现阶段重点研究课题。 一、教学现状分析 1.教材跟不上时代步伐 进入信息化时代，计算机技术的发展日
Objective To evaluate the impact of extracapsular spread (ECS) in ipsilateral neck metastasis on prognosis and its related factors in laryngeal cancer.Methods T