人类磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶的真核表达及其多克隆抗体的制备

来源 :中华地方病学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:fishsun26
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目的 在真核细胞中表达人磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHGPx)并制备抗PHGPx多克隆抗体.方法用特异引物从人睾丸组织cDNA文库中扩增出人线粒体型PHGpx cDNA,与真核表达载体pcDNA3.1/His重组,在COS-1细胞内表达PHGPx.用大肠杆菌表达的突变的PHGPx免疫动物,制备抗PHGPx抗体.结果重组体pcDNA-PHGPx转染的COS-1细胞表达了人PHGPx融合蛋白,PHGPx活性为111.5μmol·mg-1·min-1,高于对照组5倍.免疫扩散测得抗PHGPx多克隆抗血清滴度为1:16;用于蛋白印迹时稀释倍数为1:500,可见特异免疫沉淀条带.结论人PHGPx在COS-1细胞内获得了表达,抗PHGPx多克隆抗体有特异性,可以用于重组表达的PHGPx的鉴定。

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