【摘 要】
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目的为检测环境中可能存在的致癌物,建立生长阻滞和DNA损伤诱生蛋白45(GADD45α)双荧光素报告基因系统,构建新型人GADD45α荧光素酶报告基因质粒。方法在GADD45α基因启动子
【机 构】
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中国检验检疫科学研究院、国家质检总局毒理重点实验室
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目的为检测环境中可能存在的致癌物,建立生长阻滞和DNA损伤诱生蛋白45(GADD45α)双荧光素报告基因系统,构建新型人GADD45α荧光素酶报告基因质粒。方法在GADD45α基因启动子序列2.2 kb及其后基因组DNA序列2.6 kb范围内,设计3对引物进行搭桥PCR,获得全长为4924 bp的目的序列,插入pGL4.10[luc2]质粒相应位点内。质粒构建成功后测定全长并进行酶切鉴定。结果正确扩增了全长为4.9 kb的人GADD45α基因片段,成功构建了人GADD45α报告基因质粒(pGD2.2K-luc2)。结论在质粒设计中加入了存在p53非依赖性BRCA1结合位点的GADD45α基因第1个内含子,构建成功的pGD2.2K-luc2,为转染人源性细胞建立GADD45α双荧光素报告基因系统打下了基础。
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