【摘 要】
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目的 探讨人胰岛素样生长因子I（hIGF-I）转染脂肪间质干细胞（ADSCs）的效果及表达情况，探寻转染后ADSCs向软骨细胞分化的可能性。方法从兔颈后脂肪分离培养ADSCs，检测其生长特性。用Lipofectamine 2000介导将质粒pcDNA3．1＋hIGF-I转染ADSCs，转染后4～72h、传代后和稳定转染后，分别用倒置显微镜观察细胞的生长情况，计算转染效率。ELISA检测上清液中hI
【机 构】
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中国医科大学附属盛京医院骨科,沈阳110004,中国医科大学附属盛京医院骨科,沈阳110004,中国医科大学附属盛京医院骨科,沈阳110004
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目的 探讨人胰岛素样生长因子I（hIGF-I）转染脂肪间质干细胞（ADSCs）的效果及表达情况，探寻转染后ADSCs向软骨细胞分化的可能性。方法从兔颈后脂肪分离培养ADSCs，检测其生长特性。用Lipofectamine 2000介导将质粒pcDNA3．1＋hIGF-I转染ADSCs，转染后4～72h、传代后和稳定转染后，分别用倒置显微镜观察细胞的生长情况，计算转染效率。ELISA检测上清液中hIGF-I的浓度变化。免疫组化检测Ⅱ型胶原的表达。RT-PCR检测hIGF-I mRNA和Western blot检测hIGF-I蛋白表达情况。流式细胞仪检测细胞周期分布情况。结果细胞接种后4h开始贴壁，呈长梭形，24h时增多，呈集簇状分布。转染后增生活跃，倍增时间缩短。转染72h后分泌hIGF-I达高峰，为32．45ng／ml，稳定转染后hIGF-I保持恒定为28．36ng／ml。转染后细胞出现多种形态共存。免疫组化证实有大量Ⅱ型胶原形成。hIGF-I mRNA和hIGF-I蛋白呈阳性表达。细胞周期中S期增加，与未转染组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）.结论稳定转染后ADSCs可较长时间分泌较高浓度的hIGF-I，能促进ADSCs的增殖、分化，并可形成软骨样物质。
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