山羊Klf4基因克隆、原核表达和His-Klf4融合蛋白纯化

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旨在克隆山羊Klf4基因,构建重组质粒pET30a.Klf4,通过原核表达技术获得纯化的His-Klf4融合蛋白。从山羊的生殖脊中提取总RNA,用RT-PCR的方法扩增Klf4基因编码区序列,通过TA克隆构建pMD18-T-Klf4重组质粒。酶切鉴定与测序分析后将Klf4的cDNA亚克隆至pET-30a载体,构建重组质粒pET30a-Klf4。酶切鉴定后将其导入大肠杆菌BL21中,用IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Westernblotting检测确认,镍离子金属螯合亲和层析法纯化His-Klf4融合
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