【摘 要】
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目的 探讨下调解偶联蛋白-2(UCP-2)基因的表达对脂肪肝细胞损伤的影响,为存在脂肪变性的供肝提供治疗靶点.方法 采用二步胶原酶灌注法分离C57BL/6 J-ob/ob转基因肥胖小鼠的原
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科
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目的 探讨下调解偶联蛋白-2(UCP-2)基因的表达对脂肪肝细胞损伤的影响,为存在脂肪变性的供肝提供治疗靶点.方法 采用二步胶原酶灌注法分离C57BL/6 J-ob/ob转基因肥胖小鼠的原代脂肪肝细胞,用靶向小鼠UCP-2基因的RNA干扰慢病毒载体感染所获得的脂肪肝细胞,实现对UCP-2基}q的特异性敲减(实验组),另以空载体感染的脂肪肝细胞为对照.荧光显微镜镜检确定感染效率,实时聚合酶链反应鉴定敲减效果.以肿瘤坏死因子-α(TNF-α)作用于感染后的肝细胞,24 h后以碘化丙啶染色,流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Western印迹法检测凋亡蛋白酶-3(Caspase-3)的活化.结果 UCP-2基因表达被有效抑制.UCP-2基因的敲减率约为75%.实验组的肝细胞凋亡率为(4.97±0.25)%.明显低于对照组的(21.13±1.28)%(P
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