目的建立抗TNF-α单克隆抗体抗体依赖细胞介导的细胞毒性（antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC）生物学活性检测方法。方法以健康人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）作为效应细胞,自主构建膜表面表达TNF-α（membrane-expressed form of TNF-α,m TNF-α）CHO细胞作为靶细胞,通过系列不同浓度的重组抗TNF-α单克隆抗体原研药（m Ab-O）和候选药（m Ab-S）进行ADCC检测,采用四参数拟合计算二者的半数抑制浓度(IC₅₀)及m Ab-S的相对活性,并在优化实验条件的基础上进行专属性、精密度验证。结果重组抗TNF-α单克隆抗体的浓度与细胞毒性存在量效关系,符合四参数方程式,曲线在半对数坐标上呈典型S型,R2>0.99。方法经优化确定相同个体来源PBMC作为效应细胞,靶细胞数目4×10⁴个/孔,效靶比25∶1,抗体靶细胞孵育时间1 h,诱导时间4 h。该方法具有良好的专属性,对于相同个体来源的PBMC,m Ab-S活性总体与m Ab-O相近（50%²00%）,相对活性重复性RSD为4.64%,同一实验人员间隔3个工作日检测结果的RSD为12.50%,2名实验人员2次检测结果的RSD为8.21%,均符合方法验证的可接受标准。结论成功建立了重组抗TNF-α单克隆抗体ADCC生物学活性检测方法,该方法专属性强,精密度好,可作为重组抗TNF-α单克隆抗体与上市原研药相对ADCC生物学活性的评估方法。