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为建立柱前衍生化HPLC同时测定霍山石斛中13种游离氨基酸的方法。采用Waters XBridge C18色谱柱（250 mm×4. 6 mm,5μm）;流动相为0. 1 mol/L醋酸钠缓冲液-乙腈∶水（4∶1）,梯度洗脱;流速1. 0 mL/min,柱温35℃;检测波长254 nm。在该色谱条件下霍山石斛中13种游离氨基酸分离较好,平均加样回收率为92. 7%104. 3%,RSD <2. 5%。该方法简便、准确、重现性好,适用于霍山石斛中13种游离氨基酸的同时测定。