【摘 要】
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目的构建能稳定表达T315I的BCR/ABL的小鼠BP210-T315I细胞株,并观察该细胞株对酪氨酸激酶抑制剂STI571的敏感性。方法采用PCR法将重组逆转录病毒载体MIGR-P210中的abl基因第9
【机 构】
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重庆医科大学临床血液学教研室临床检验诊断学教育部重点实验室;
【基金项目】
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国家自然科学基金(30871102)
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目的构建能稳定表达T315I的BCR/ABL的小鼠BP210-T315I细胞株,并观察该细胞株对酪氨酸激酶抑制剂STI571的敏感性。方法采用PCR法将重组逆转录病毒载体MIGR-P210中的abl基因第944位碱基C定点突变为T,再将该位点突变成功的逆转录病毒载体转染到包装细胞内,收集病毒,感染BaF3细胞,经筛选和亚克隆获得稳定表达T315I的BCR/ABL蛋白的小鼠BP210-T315I细胞。采用RT-PCR、DNA测序和Western blot鉴定abl基因第944位碱基是否发生突变;MTT法检测BP210-T315I细胞对STI571的耐药性。结果 T315I的bcr/abl基因已整合到BaF3细胞基因组中,B210-T315I细胞能稳定表达T315I的bcr/abl基因与蛋白;与BaF3-P210细胞株相比,经STI571处理后,BP210-T315I细胞对STI571明显耐药,其耐药倍数约为100。结论已成功构建稳定表达小鼠T315I的转化细胞株,该细胞株具有对STI571耐药的恶性表型特征。
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