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目的
探讨高压氧对脂肪干细胞成骨分化的影响。
方法体外分离培养小鼠脂肪干细胞并传代。取第4代脂肪干细胞植入96孔板(2×105个/孔),将细胞随机分为对照组和高压氧组。对照组利用成骨分化培养基在37 ℃ 5% CO2培养箱中进行培养,高压氧组与对照组相同的培养条件下给予高压氧干预(每24 h,将细胞置于高压氧舱内,给予通纯氧10 L/min,15 min洗舱,然后将氧流量调至2~3 L/min开始升压,升压时间为20~25 min,升至压力为0.25 MPa(2.5 ATA),持续60 min,然后匀速减压,时间为20~25 min)。在第7、14、21天,使用碱性磷酸酶的活性检测试剂盒检测碱性磷酸酶的活性;第14、21天,使用骨钙素定量检测试剂盒检测骨钙素浓度;第21天,茜素红染色钙化结节。数据采用两独立样本t检验、配对样本t检验、重复测量方差分析。
结果培养的细胞表达间充质干细胞标志物CD90、CD105,不表达造血细胞标志物CD34。培养7、14、21 d,与对照组比较,高压氧组碱性磷酸酶活性均明显升高[高压氧组:(29.33±3.31)、(48.47±7.62)、(46.69±5.75)U/μl,对照组:(36.50±4.56)、(61.31±6.37)、(65.99±4.56) U/μl],差异有统计学意义(均P<0.01)。培养14、21 d,与对照组比较,高压氧组骨钙素浓度表达明显增加(均P<0.05)。培养21 d,茜素红染色结果显示,高压氧组较对照组诱导钙化结节数量多,矿化面积大。
结论高压氧治疗可增加脂肪间充质干细胞的成骨分化。