通过定向进化策略提高酯酶立体选择性的研究

来源 :高校化学工程学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：wangliang19910125

【摘要】

：

对菌株Rhodobacter sphaeroides的RSP-2728酯酶基因进行立体选择性定向进化研究,建立了有效的定向进化策略,以及通过扁桃酸甲酯水解反应所产生的酸根离子浓度来监测酶活的高

【作者】

：

汤晓玲于洪巍

【机构】

：

浙江大学化学工程与生物工程学系

【出处】

：

高校化学工程学报

【发表日期】

：

2011年2期

【关键词】

：

酯酶手性选择性定向进化易错PCR 高通量筛选 esterase enantioselectivity directed evolution erro

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对菌株Rhodobacter sphaeroides的RSP-2728酯酶基因进行立体选择性定向进化研究,建立了有效的定向进化策略,以及通过扁桃酸甲酯水解反应所产生的酸根离子浓度来监测酶活的高通量筛选方法。利用易错PCR技术,进行了三轮突变,获得了突变株A6A5,B7F11和C8G1,对映体选择性（E值）从3.13分别提高到5.32,8.77和14.01;提高了1.7倍,2.8倍和4.5倍。序列分析表明,突变体A6A5有一个62位上的氨基酸发生了改变,由原先的天冬酰胺变成了酪氨酸;突变体B7F11的62位

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