【摘 要】
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目的探讨miR-375对骨肉瘤细胞增殖凋亡的影响及机制。方法 RT-PCR检测骨肉瘤组织及对应的瘤旁组织中miR-375的表达水平。以人骨肉瘤细胞为研究对象,细胞转染miR-375模拟物(mi
【机 构】
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南京医科大学附属无锡市人民医院骨科,无锡市中医医院骨科,苏州大学附属第一医院骨科
【基金项目】
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无锡市医管中心技术重大协作项目(YGZX1111);南京医科大学面上项目(MS201508)
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目的探讨miR-375对骨肉瘤细胞增殖凋亡的影响及机制。方法 RT-PCR检测骨肉瘤组织及对应的瘤旁组织中miR-375的表达水平。以人骨肉瘤细胞为研究对象,细胞转染miR-375模拟物(miR-375 mimics组)和mimics control(阴性对照组),同时设置空白对照组,只加入转染试剂。培养48 h后,RT-PCR检测细胞中miR-375表达水平,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,碱性磷酸酶酶标仪读数法检测细胞中碱性磷酸酶活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western印迹检测细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(酶切Caspase)-3、酶切Caspase-9表达水平。靶基因预测软件预测miR-375的靶基因,荧光素酶报告基因鉴定靶基因。结果 miR-375在骨肉瘤组织中的表达水平与瘤旁组织相比明显降低(P<0. 01)。阴性对照组细胞存活率、凋亡率、碱性磷酸酶活性及酶切Caspase-3、酶切Caspase-9表达水平与空白对照组相比差异无统计学意义(P>0. 05)。miR-375 mimics组细胞凋亡率、碱性磷酸酶活性及酶切Caspase-3、酶切Caspase-9表达水平均明显高于空白对照组,而细胞存活率明显低于空白对照组,差异有统计学意义(P<0. 01)。靶基因预测软件预测并经荧光素酶报告基因鉴定特化蛋白(Sp)1是miR-375的靶基因。结论 miR-375在骨肉瘤组织中表达下调。miR-375靶向Sp1抑制骨肉瘤细胞增殖,促进骨肉瘤细胞凋亡,促进骨肉瘤细胞发生成骨分化。
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