【摘 要】
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目的 构建含有不同长度 EphA3 基因启动子片段的报告基因载体,研究其在 293T 细胞和 MEF细胞中的转录活性.方法 以Balb/C小鼠基因组 DNA 为模板,扩增不同长度的 EphA3 基因启
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属同济医院神经科
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目的 构建含有不同长度 EphA3 基因启动子片段的报告基因载体,研究其在 293T 细胞和 MEF细胞中的转录活性.方法 以Balb/C小鼠基因组 DNA 为模板,扩增不同长度的 EphA3 基因启动子片段,并克隆进入荧光素酶报告基因质粒 pGL3-Basic 真核表达载体内.酶切鉴定及基因测序无误后,将重组质粒和 pRI-CMV 内对照质粒共转染 293T 和 MEF 细胞,分析不同长度的 EphA3 基因启动子片段的转录活性.结果 酶切和测序鉴定表明表达载体构建成功,EphA3 基因的核心启动子区域位于-279bp～+110 bp之间,在 293T 细胞和 MEF 细胞中其转录活性相似.结论 成功构建了荧光素报告基因重组质粒,并确定了E-phA3 基因的核心启动子区域.
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