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建立同时检测饲料中邻氯青霉素、青霉素G、羟氨苄青霉素、苯唑青霉素、氨苄青霉素的高效液相色谱法。实验方法参照有关文献的样品前处理方法及测定方法,进行周密验证后,将某些关键步骤进行细化。结果表明：邻氯青霉素、青霉素G、羟氨苄青霉素、苯唑青霉素、氨苄青霉素的最低检出浓度均为5 mg/kg,方法回收率在60.4%~103.6%之间,精密度范围在1.45%~12.60%之间。该方法优化了检测参数,并且准确可靠。